本文關鍵詞：急性胰腺炎時自噬變化的意義及干擾素γ對自噬影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第二軍醫(yī)大學》 2013年

急性胰腺炎時自噬變化的意義及干擾素γ對自噬影響的實驗研究

劉曉  

【摘要】：研究背景 急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是臨床常見的急癥，國外報告其發(fā)病率10/105～44/105，近年來呈升高趨勢。約20%患者可發(fā)展為重癥急性胰腺炎，病死率高達15%～30%，病情危重，預后兇險，已經(jīng)成為威脅人類健康和生命的重要殺手。盡管國內(nèi)外學者對急性胰腺炎的防治進行了多年的研究，但迄今還沒有針對急性胰腺炎特效的防治措施。因此，深入研究AP的發(fā)病機制，探索其啟動的關鍵過程，不僅具有重要的學術價值，而且將有助于尋找和建立有針對性的救治方法，以期提高急性胰腺炎的救治水平，具有重要的的意義。 自噬是廣泛存在于真核生物中的生命現(xiàn)象，屬程序性細胞死亡的一種。自噬發(fā)生時，在細胞內(nèi)形成“雙層膜”結構的囊泡即自噬體，包裹胞質(zhì)成分和某些細胞器碎片，送入溶酶體中并進行多種酶的消化及降解，為細胞內(nèi)再循環(huán)提供能量和小分子物質(zhì)。自噬是急性胰腺炎早期發(fā)生的事件，在急性胰腺炎中的作用機制存在很多爭議。有學者采用敲除自噬相關基因小鼠研究后發(fā)現(xiàn)急性胰腺炎減輕，同時自噬相關蛋白減少，推測自噬在急性胰腺炎中被誘導增強，自噬對胰腺起損害作用；有學者研究發(fā)現(xiàn)在急性胰腺炎中長壽蛋白的降解大大減少（長壽蛋白通過自噬途徑降解），大量空泡聚集，認為自噬在急性胰腺炎中下降，自噬對胰腺起保護作用；另外有學者認為自噬是一個動態(tài)的過程，自噬過程在急性胰腺炎中被破壞，自噬和胰腺炎起相互促進作用。這些相互矛盾結果顯示自噬在急性胰腺炎發(fā)生中存在很大的爭議。 干擾素γ是一種來自T淋巴細胞培養(yǎng)液上清的蛋白，，具有免疫調(diào)節(jié)和抗細胞增殖作用。目前有研究發(fā)現(xiàn)干擾素γ可促進自噬。另有文獻報告干擾素γ對急性胰腺炎有一定影響。為了進一步探討自噬在急性胰腺炎發(fā)生過程中的變化及其病理意義，并觀察干擾素γ對急性胰腺炎及自噬的影響，并探討其作用機制，擬開展本實驗研究。 研究目標 1.建立大鼠重癥急性胰腺炎模型。觀察急性胰腺炎發(fā)生過程中自噬活性的變化，探討其病理意義。 2.觀察干擾素γ對急性胰腺炎炎癥及自噬的影響，初步探討其機制。 研究方法圍繞上述目標，本研究采用以下研究方法： 1．動物模型的建立 采用左旋精氨酸400mg/100g（腹腔注射，2次，間隔1小時）方法，構建急性胰腺炎大鼠模型。 2．電鏡 大鼠新鮮胰腺組織取下后立即置于25%戊二醛電鏡固定液中，切成1mm3大小組織塊，送電鏡室，于透射電鏡下觀察自噬相關結構。 3．ELISA 造模取血，離心，上清用RD試劑盒行ELISA檢測，檢測不同時間點AMY、TAP的濃度及IL-1、IL-6、TNF-α等炎癥因子的水平。 4．HE染色 標本置于4％中性緩沖甲醛中固定24小時，組織脫水石蠟包埋，室溫保存，行HE染色后觀察胰腺炎癥程度。 5．免疫組化 經(jīng)漂洗，封閉，一抗和二抗孵育后檢測LC3、Beclin-1、Lamp-2等蛋白在胰腺組織中的表達。 6．Western Blot 經(jīng)過提取蛋白、凝膠電泳、轉膜、標記一抗和二抗、曝光等步驟觀察LC3、Beclin-1、Lamp-2、GAPDH等蛋白的表達。 7. qRT-PCR 通過RNA提取、逆轉錄和qRT-PCR的方法檢測胰腺組織LC3、Beclin-1、Lamp-2、Ⅲ型PI3K、GAPDH等蛋白的基因表達。 8．統(tǒng)計學分析 全部數(shù)據(jù)通過SPSS11.5統(tǒng)計軟件X進行分析，取P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。計量資料實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)標準差（±S）表示；兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多組樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），方差齊時采用LSD-t或SNK-q檢驗，方差不齊時采用Dunnett's T3或Dunnett's C檢驗。 研究結果 1．20%L-精氨酸腹腔注射可構建重癥急性胰腺炎模型 先后采用250mg/100g、300mg/100g、400mg/100g和500mg/100g等不同給藥劑量的20%L-精氨酸腹腔注射構建重癥急性胰腺炎大鼠模型，結果發(fā)現(xiàn)400mg/100g的劑量腹腔注射2次，間隔1小時造模，可成功建立重癥急性胰腺炎大鼠模型。 2．急性胰腺炎誘導增強自噬的發(fā)生 免疫組化、Western Blot和qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，大鼠急性胰腺炎模型組自噬相關因子LC3、Beclin-1的蛋白與mRNA表達顯著上調(diào)；電鏡觀察發(fā)現(xiàn)急性胰腺炎組大鼠胰腺組織自噬相關超微結構明顯多于對照組。結果證實急性胰腺炎可誘導增強自噬的發(fā)生。 3．調(diào)控自噬可影響胰蛋白酶原的活化程度和急性胰腺炎的損傷程度 分別采用自噬誘導劑雷帕霉素（RAP）和自噬阻斷劑氯喹（CQ）及3-甲基腺嘌呤（3-MA）調(diào)控自噬活性，發(fā)現(xiàn)誘導自噬后TAP明顯升高，阻斷自噬后TAP下降；SAP9h后誘導劑組大鼠胰腺壞死病理評分高于急性胰腺炎組，阻斷劑組與急性胰腺炎組無明顯差別，24h后誘導劑組胰腺壞死評分高于急性胰腺炎組，阻斷劑組胰腺壞死評分低于急性胰腺炎組。結果表明急性胰腺炎時自噬可促進胰蛋白酶原的激活，并參與胰腺的損傷。 4．干擾素γ在急性胰腺炎時可誘導自噬的發(fā)生及自噬體和溶酶體的融合 與急性胰腺炎對照組相比，急性胰腺炎模型大鼠注射干擾素γ，免疫組化、Western Blot和qRT-PCR檢測均表明自噬相關因子LC3及Beclin-1的蛋白和mRNA表達明顯上調(diào)；溶酶體相關膜蛋白-2（Lamp-2）蛋白和基因表達亦明顯上調(diào)。結果表明干擾素γ可進一步誘導自噬的發(fā)生，并促進自噬體和溶酶體的融合。 5．干擾素γ能促進胰蛋白酶原的激活和加重急性胰腺炎時胰腺的損傷 與急性胰腺炎對照組相比，急性胰腺炎模型大鼠注射干擾素γ后胰腺水腫、炎癥、壞死、出血評分明顯增高；血漿炎癥因子IL-6濃度明顯升高，TAP在各時間點均明顯上升；淀粉酶峰值前移。結果表明干擾素γ能促進胰蛋白酶原的激活，并加重急性胰腺炎時的炎癥反應與胰腺損傷。 6．急性胰腺炎時干擾素γ可能通過Ⅲ型PI3K通路來誘導自噬和加重炎癥 qRT-PCR顯示干擾素γ組Ⅲ型PI3K復合物（vps34）mRNA明顯高于急性胰腺炎對照組，提示急性胰腺炎時干擾素γ可能通過該通路誘導自噬和加重胰腺損傷和炎癥。 結論 急性胰腺炎可誘導增強自噬的發(fā)生，自噬促進胰蛋白酶原的激活，并參與胰腺的損傷；急性胰腺炎時給予干擾素γ可進一步誘導自噬的發(fā)生，促進胰蛋白酶原的活化和加重胰腺的損傷，該效應可能通過Ⅲ型PI3K通路實現(xiàn)。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R576
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 秦仁義;吳在德;鄒聲泉;肖雪明;裘法祖;;新型的膽源性胰腺炎動物模型[J];中華實驗外科雜志;1998年01期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 夏慶;中西醫(yī)結合治療重癥胰腺炎中預防性抗生素應用價值的質(zhì)疑[J];成都中醫(yī)藥大學學報;2004年01期

2 王浩,張震寰,燕曉雯,李維勤,全竹富,李寧,黎介壽;持續(xù)血液濾過對重癥急性胰腺炎血流動力學和氧代謝影響的實驗研究[J];腸外與腸內(nèi)營養(yǎng);2005年01期

3 劉旭盛,JohnA.Windsor,GlennJamesFarrant,FikriM.AbuZidan,L.JonathanZwi;使用滲透壓泵以Caerulein誘導大鼠急性輕度水腫性胰腺炎模型[J];第三軍醫(yī)大學學報;2000年04期

4 樂湘華;王雷;趙曉晏;;PDTC對重癥急性胰腺炎E-selectin、氧化應激相關酶表達的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2009年08期

5 史學深;方馳華;朱明德;何鄒駿;陳鐵軍;;重癥急性胰腺炎大鼠DDFA對肺損傷細胞凋亡及Bax,Bcl-2表達的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2006年12期

6 梁卓;馬騰;趙保民;王占明;黃博;顧炳權;張惠中;黃裕新;;生豆?jié){灌胃對急性胰腺炎小鼠胰腺外分泌功能的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2008年04期

7 劉納新,施紅旗,張啟瑜;急性胰腺炎相關性肺損傷發(fā)病機制的研究進展[J];肝膽胰外科雜志;2005年01期

8 邱燕軍,張啟瑜;急性胰腺炎動物模型的研究概況和進展[J];肝膽胰外科雜志;2005年03期

9 梁超;馮壽全;張曉云;沙盈盈;朱曉明;;活血清解湯對高脂血癥性胰腺炎大鼠瘦素的調(diào)控作用[J];肝膽胰外科雜志;2011年05期

10 謝文瑞,陳墾;急性胰腺炎動物模型的研究進展[J];廣東藥學院學報;2005年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉君君;陳墾;龍友明;謝文瑞;王暉;;L-精氨酸誘導大鼠急性壞死性胰腺炎模型的建立[A];中國藥學會應用藥理專業(yè)委員會第三屆學術會議、中國藥理學會制藥工業(yè)專業(yè)委員會第十三屆學術會議暨2008生物醫(yī)藥學術論壇論文匯編[C];2008年

2 克迎迎;袁培培;翟英英;張鑫;李孟;王紳;王小蘭;馮衛(wèi)生;鄭曉珂;;卷柏總黃酮及穗花杉雙黃酮對HepG2細胞胰島素抵抗的改善作用[A];2013年中國藥學大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

3 劉洪斌;關鑫;王宇歆;涂正偉;李東華;鹿燕敏;;基于四級桿飛行時間質(zhì)譜技術的大鼠急性胰腺炎尿液代謝組學初步研究[A];第九次全國中西醫(yī)結合基礎理論研究學術研討會論文匯編[C];2013年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于攀;氫氣促糖尿病創(chuàng)面愈合的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2011年

2 王文軍;內(nèi)給氧和NAC聯(lián)合治療早期重癥急性胰腺炎的實驗研究[D];中南大學;2003年

3 張勇;ET-3基因在大鼠實驗性急性壞死性胰腺炎中表達的實驗研究[D];昆明醫(yī)學院;2003年

4 郭海峰;ERK和NF-κB的活化對大鼠重癥胰腺炎中性粒細胞凋亡延遲的調(diào)控作用[D];吉林大學;2004年

5 劉洪斌;急性出血壞死性胰腺炎肺損傷發(fā)病機制及中藥治療的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2004年

6 董文珠;基質(zhì)金屬蛋白酶在急性胰腺炎肺損傷與胰腺組織重建中的作用機制[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

7 趙秋玲;飲食因素對急性胰腺炎的影響及其機制研究[D];四川大學;2004年

8 陳凌云;復合乳酸菌對不同營養(yǎng)途徑治療的重癥急性胰腺炎大鼠腸屏障功能的影響及其機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2006年

9 江學良;骨髓間充質(zhì)干細胞在胰腺生理更新和病理再生中的作用[D];第二軍醫(yī)大學;2006年

10 董春山;異丙酚對機械通氣肺損傷影響的動物實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學;2006年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金魁;高壓氧對大鼠急性胰腺炎影響的研究[D];安徽醫(yī)科大學;2010年

2 程凱;烏司他丁對重癥急性胰腺炎大鼠血清MIF水平及中性粒細胞凋亡的干預作用研究[D];濱州醫(yī)學院;2010年

3 康曉征;胰癉貼治療重癥急性胰腺炎模型大鼠TLR4/NF-KB信號機制研究[D];瀘州醫(yī)學院;2011年

4 王勇;辛伐他汀對大鼠高脂血癥合并急性水腫性胰腺炎時NF-κB及炎癥介質(zhì)表達的影響[D];瀘州醫(yī)學院;2011年

5 蘇曉菊;晚期糖基化終末產(chǎn)物受體及其配體HMGB1在大鼠重癥急性胰腺炎發(fā)病中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

6 張琳琳;大鼠急性胰腺炎模型的建立及不同壓力高壓氧治療效果的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學;2011年

7 楊元生;清胰顆粒對SAP大鼠部分臟器的保護作用及AQP-4表達影響的研究[D];廣東藥學院;2011年

8 張秀平;金黃益膽顆粒對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺組織中ICAM-1、MCP-1和TGF-β1表達的影響[D];河北聯(lián)合大學;2011年

9 孫世娟;國產(chǎn)與進口醋酸奧曲肽治療急性胰腺炎的療效評價[D];吉林大學;2011年

10 周春華;脂氧素A_4類似物LXA_4-ME對急性壞死性胰腺炎大鼠的保護作用及其機制的實驗研究[D];蘇州大學;2011年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李宗明;急性胰腺炎的發(fā)病原理與病因?qū)W[J];臨床內(nèi)科雜志;1987年02期

2 劉斌,凌奇荷,朱小寒;急性胰腺炎診斷標志物的比較研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2004年01期

3 畢明君;王志華;湯冬靜;;尿胰蛋白酶原-2與血尿淀粉酶在診斷急性胰腺炎中的應用[J];醫(yī)學檢驗與臨床;2007年06期

4 趙英恒;;急性胰腺炎診斷試驗的敏感性和特異性的研究[J];國外醫(yī)學.內(nèi)科學分冊;1986年08期

5 吳傳慶;尤大鈺;;胃腸激素對急性腺炎的保護及可能的治療作用[J];東南大學學報(醫(yī)學版);1989年04期

6 岳喬紅;急性胰腺炎的實驗室診斷及其進展[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;2002年05期

7 余文;吳偉;張少輝;王堯華;;急性胰腺炎發(fā)病機理的研究進展[J];中國普外基礎與臨床雜志;2006年06期

8 平珣;;烏司他丁和加貝酯治療急性輕癥胰腺炎療效比較[J];山東醫(yī)藥;2006年04期

9 程望林;鄧燕妮;;血尿淀粉酶在急性胰腺炎診斷中的作用[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年16期

10 楊家驂 ,黃炳耀;問題解答[J];安徽醫(yī)科大學學報;1979年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林祖朝;董米連;王敏;;胃切除術并發(fā)急性胰腺炎13例分析[A];2005年浙江省外科學術會議論文匯編[C];2005年

2 鄭育聰;;SPIO標記兔骨髓間質(zhì)干細胞急性胰腺炎家兔體內(nèi)移植的活體示蹤研究[A];中華醫(yī)學會第16次全國放射學學術大會論文匯編[C];2009年

3 周兵;張齊放;;一例急性胰腺炎兒童行ERCP術的護理體會[A];中華護理學會全國兒科護理學術交流暨專題講座會議論文匯編[C];2009年

4 吳承智;高暉;何亦工;;89例急性胰腺炎診斷治療的體會[A];2000年全國危重病急救醫(yī)學學術會議論文集[C];2000年

5 李玲;;急性胰腺炎護理[A];全國神經(jīng)內(nèi)外科�？谱o理學術交流暨專題講座會議論文匯編[C];2004年

6 周蒨;陳焱;;妊娠合并急性胰腺炎3例[A];第四屆長三角婦產(chǎn)科學術論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學術年會論文匯編[C];2009年

7 姜莉蕓;耿嘉蔚;;中西醫(yī)結合治療急性胰腺炎34例臨床觀察[A];2004年全國危重病急救醫(yī)學學術會議論文集[C];2004年

8 蘇勇泉;;急性胰腺炎發(fā)病早期的CT診斷[A];第十三屆全國臨床醫(yī)學影像學術會議論文匯編[C];2003年

9 胡玲;胡兵;唐承薇;;膽囊摘除術后急性胰腺炎的病因探討[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（上冊）[C];2007年

10 沈雁波;;尿胰蛋白酶原激活肽與急性胰腺炎早期分型[A];中華醫(yī)學會急診醫(yī)學分會第十三次全國急診醫(yī)學學術年會大會論文集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔乃強;[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2004年

2 楊瑩丹;[N];民族醫(yī)藥報;2006年

3 周芳;[N];吉林日報;2007年

4 常山;[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

5 魏開敏;[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

6 北京天壇醫(yī)院 朱麗麗;[N];保健時報;2008年

7 河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院消化科 姜慧卿;[N];健康報;2010年

8 付唆林;[N];家庭醫(yī)生報;2007年

9 姜誠;[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

10 龔經(jīng)文;[N];家庭醫(yī)生報;2007年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊斌;T、B淋巴細胞對急性胰腺炎的作用及其免疫治療[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

2 徐浩銅;急性胰腺炎伴胰周積液向胸腔引流通道的影像解剖學研究[D];第三軍醫(yī)大學;2012年

3 趙佳正;P物質(zhì)和硫化氫在評價急性胰腺炎嚴重程度中的作用[D];中南大學;2012年

4 羅雙靈;急性胰腺炎患者外周血單個核細胞Toll樣受體9mRNA的表達研究[D];中南大學;2013年

5 陳辰;羅格列酮對大鼠急性胰腺炎肺損傷的作用及其機制探討[D];武漢大學;2009年

6 李永文;急性胰腺炎患者血清中miR-216a的表達及其臨床意義的研究[D];中南大學;2012年

7 楊淑麗;自噬在大鼠急性壞死性胰腺炎中的作用及調(diào)控機制研究[D];蘇州大學;2012年

8 梁垚;降鈣素原和sTREM-1對急性胰腺炎嚴重程度的早期預測價值[D];中南大學;2013年

9 李軍成;急性胰腺炎急性期的病變研究[D];蘇州大學;2002年

10 錢祝銀;重癥急性胰腺炎治療的基礎和臨床研究[D];南京醫(yī)科大學;2002年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉堯;胰蛋白酶原激活肽與高遷徙率族蛋白1在急性胰腺炎大鼠模型中的表達及意義[D];遵義醫(yī)學院;2010年

2 崔玉順;延邊地區(qū)603例急性胰腺炎病因及預后危險因素的調(diào)查分析[D];延邊大學;2010年

3 江志俊;急性胰腺炎病情嚴重程度與預后的早期評估指標探討[D];福建醫(yī)科大學;2010年

4 尹朝;BISAP對急性胰腺炎預后的評估價值[D];山東大學;2010年

5 郭潔;三種評分標準對急性胰腺炎病情嚴重程度及預后評估的比較[D];福建醫(yī)科大學;2011年

6 程勇;大鼠急性胰腺炎細胞凋亡異常及Fas/FasL系統(tǒng)表達的研究[D];武漢大學;2004年

7 祁高亮;75例急性胰腺炎的臨床證治回顧性研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2010年

8 汪國宴;MSCT評價急性胰腺炎病變程度與肝損傷的相關性研究[D];河北醫(yī)科大學;2011年

9 賀麗;急性胰腺炎患者血清IL-15、IL-18和sTNF-1R的變化及其意義[D];中國醫(yī)科大學;2002年

10 崔志剛;急性胰腺炎發(fā)病特點及嚴重程度預測指標的研究[D];天津醫(yī)科大學;2004年

  本文關鍵詞：急性胰腺炎時自噬變化的意義及干擾素γ對自噬影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：184221