發(fā)布時(shí)間：2018-03-21 06:34

  本文選題：丙型肝炎病毒　切入點(diǎn)：核心蛋白　出處：《南華大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b基因型核心蛋白(Core)與非結(jié)構(gòu)蛋白4B(Nonstructural protein4B,NS4B)對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響，以初步探索HCV1b基因型Core、NS4B與HepG2細(xì)胞凋亡的關(guān)系及其可能的相關(guān)機(jī)制。 方法： 利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將HCV1b基因型Core與NS4B的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，同時(shí)以轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3.1(-)和未轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞作對(duì)照(四組細(xì)胞分別命名為：pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組、pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組)；轉(zhuǎn)染48h后，用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中Core與NS4B mRNA及蛋白的表達(dá)；并在有無(wú)TNF-α的因素下，MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，觀察Core與NS4B對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況；運(yùn)用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞中活化型Caspase-3及XIAP mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，RT-PCR及Western Blot檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)HCV Core、NS4B mRNA及蛋白。 2.RT-PCR及Western Blot檢測(cè)到未用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p0.01)，XIAP的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p0.01)，XIAP的mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細(xì)胞相比，用TNF-α處理的四組細(xì)胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯升高(p0.01)，且pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組細(xì)胞的XIAP的mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量減少(p0.01)，pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組細(xì)胞的XIAP的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量增加(p0.01)。其余組間的細(xì)胞的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量相比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.MTT法檢測(cè)到轉(zhuǎn)染后1~5天，pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的死亡率均小于pcDNA3.1(-)組與空白對(duì)照組(p0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、 pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的死亡率均大于pcDNA3.1(-)組與空白對(duì)照組(p0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細(xì)胞相比，用TNF-α處理的四組細(xì)胞的死亡率明顯增加(p0.01)。其余組間的細(xì)胞死亡率相比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞凋亡率均低于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、 pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的凋亡率均高于pcDNA3.1(-)組與空白對(duì)照組(p0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細(xì)胞相比，用TNF-α處理的四組細(xì)胞的凋亡率明顯升高(p0.01)。其余組間的細(xì)胞凋亡率相比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1.HCV1b基因型Core與NS4B蛋白能下調(diào)HepG2細(xì)胞的活化型Caspase-3的表達(dá)，上調(diào)XIAP的表達(dá)。 2.在TNF-α誘導(dǎo)下，HCV1b基因型Core與NS4B蛋白能上調(diào)HepG2細(xì)胞的活化型Caspase-3的表達(dá)，下調(diào)XIAP的表達(dá)，，從而促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective:
Study of hepatitis C virus (hepatitis C, virus, HCV) genotype 1b core protein (Core) and non structural protein 4B (Nonstructural protein4B NS4B) on the apoptosis of HepG2 cells, to explore the genotype of HCV1b Core, the relationship between NS4B and apoptosis of HepG2 cells and its possible mechanism.
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本文編號(hào)：1642672