本文選題：肝纖維化　切入點(diǎn)：肝星狀細(xì)胞　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：肝纖維化是對(duì)由于病毒、代謝、酒精、化學(xué)毒物、遺傳等各種原因?qū)е碌穆愿闻K損傷的應(yīng)答及修復(fù)反應(yīng)，這一進(jìn)程會(huì)致使細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)過(guò)多沉積，多以Ⅰ型膠原為主。若是病因持續(xù)存在，肝纖維化最后將會(huì)發(fā)展成肝硬化甚至于肝癌。肝星狀細(xì)胞(hepaticstellate cell, HSC)的活化、增殖，致使ECM大量合成及異常堆積，是形成肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。 HSC是肝臟的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，健康狀態(tài)下以靜止形式存在于正常肝臟中。多數(shù)研究顯示，當(dāng)致病因素作用于肝臟使肝受到損害時(shí)，HSC即轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚螒B(tài)且持續(xù)增殖，大量Ⅰ型膠原等的分泌推進(jìn)了肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)和金屬蛋白酶抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMPs)是調(diào)節(jié)ECM降解的重要細(xì)胞因子，而活化的HSC是其主要來(lái)源。多種細(xì)胞因子能夠引起HSC增殖、膠原合成及細(xì)胞遷移，如表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growthfactor, EGF)、血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor, PDGF)等。 肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(heparin-binding epidermal growth factor-likegrowth factor, HB-EGF)是表皮生長(zhǎng)因子受體家族(ErbB)的配體之一,且擁有一個(gè)與肝素相結(jié)合的特殊區(qū)域。它可以結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR/ErbB1和ErbB4)，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；經(jīng)由絲裂原蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路，參加了許多細(xì)胞的增殖與遷移過(guò)程。研究表明，HB-EGF能夠促進(jìn)HSC的增殖、抑制凋亡，其對(duì)HSC膠原代謝及細(xì)胞遷移的影響尚不明確。 本課題研究HB-EGF對(duì)肝星狀細(xì)胞膠原代謝和細(xì)胞遷移的影響，進(jìn)一步探討HB-EGF在肝纖維化發(fā)生過(guò)程中的作用，從而作為了解肝纖維化的發(fā)生機(jī)制和給予有效醫(yī)治的理論依據(jù)。 目的：研究HB-EGF對(duì)HSC膠原代謝及細(xì)胞遷移的影響，探討HB-EGF影響細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制。 方法：人肝星狀細(xì)胞株HSC LX-2用于實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用體外HSC培養(yǎng)技術(shù)，應(yīng)用HB-EGF的特異性抑制劑CRM197預(yù)干預(yù)24h，外源性給予HB-EGF干預(yù)24h。免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)α-SMA的表達(dá)；Western Blot方法檢測(cè)Ⅰ型膠原、α-SMA的表達(dá)；Real time-PCR方法檢測(cè)α-SMA、Ⅰ型膠原、MMP-1和TIMP-1的mRNA表達(dá)；ELISA法檢測(cè)Ⅰ型膠原、MMP-1和TIMP-1蛋白表達(dá)；采用劃痕實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。 結(jié)果：①免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)α-SMA的表達(dá)：HB-EGF組較control組陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞明顯增多，，CRM197組較control組陽(yáng)性表達(dá)減少。②Western blot方法檢測(cè)α-SMA的蛋白表達(dá)，HB-EGF組(0.74±0.04)較control組(0.43±0.02)升高，CRM197組(0.33±0.01)與control組(0.43±0.02)相比、HB-EGF+CRM197組(0.44±0.02)與HB-EGF組(0.74±0.04)相比，表達(dá)下降(P0.01)；檢測(cè)Ⅰ型膠原的蛋白表達(dá)，HB-EGF組(0.57±0.06)與control組(0.36±0.02)比較，表達(dá)升高(P0.05)；CRM197組(0.14±0.02)與control組(0.36±0.02)相比、HB-EGF+CRM17組(0.17±0.02)與HB-EGF組(0.57±0.06)相比，表達(dá)下降(P0.01)。③Real time-PCR方法檢測(cè)α-SMA的mRNA表達(dá)，control組、HB-EGF組、HB-EGF+CRM17組、CRM197組結(jié)果分別為1、4.37±0.43、1.97±0.26、0.32±0.12，結(jié)果與Western blot結(jié)果一致(P0.01)；檢測(cè)Ⅰ型膠原的mRNA表達(dá)，HB-EGF組(4.77±0.62)較control組(1±0)明顯升高(P0.01)，CRM197組(0.15±0.05)與control組(1±0)相比、HB-EGF+CRM17組(0.49±0.18)與HB-EGF組(4.77±0.62)相比，表達(dá)下降(P0.05)；檢測(cè)TIMP1、MMP1表達(dá)：HB-EGF組與control組相比，TIMP1表達(dá)增加(5.90±0.34vs1±0)(P0.01)，MMP1的表達(dá)無(wú)明顯差異(1.27±0.20vs1±0)(P＞0.05)，MMP1/TIMP1比值下降(0.22±0.04、1±0)(P0.05)。④ELISA方法檢測(cè)Ⅰ型膠原、TIMP1、MMP1的表達(dá)，結(jié)果與Real time-PCR結(jié)果一致(P0.05)。⑤劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移:干預(yù)后檢測(cè)劃痕未融合面積，HB-EGF組(1.23±0.1)比control組(1.78±0.3)明顯減小，CRM197組(2.49±0.38)比control組(1.78±0.3)增大，兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：HB-EGF使HSC的α-SMA表達(dá)增多，證實(shí)HSC進(jìn)一步活化；HB-EGF促進(jìn)HSC膠原合成；HB-EGF可通過(guò)從mRNA水平增加TIMP-1的表達(dá)，從而加劇MMP-1和TIMP-1比例失衡，抑制已合成的ECM降解、促進(jìn)沉積；HB-EGF促進(jìn)細(xì)胞遷移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1574159