本文關(guān)鍵詞：大鼠胰腺星狀細(xì)胞系的建立及其介導(dǎo)胰腺纖維化、炎癥、免疫功能的評(píng)價(jià)　出處：《吉林大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景和目的：胰腺星狀細(xì)胞（PSC）在胰腺纖維化的發(fā)病機(jī)制中起到至關(guān)重要的作用，近來的研究顯示：PSC具有胰腺外分泌功能，且具有祖細(xì)胞、免疫細(xì)胞和中介細(xì)胞的功能。由于缺乏穩(wěn)定的可在體外進(jìn)行研究其多種功能的PSC系，PSC的廣泛、深入研究受到限制。越來越多的證據(jù)表明結(jié)蛋白（desmin）作為PSC的一種特異性細(xì)胞骨架蛋白，只在部分PSC中表達(dá)。本研究的目的是建立一種desmin表達(dá)陽性的永生化大鼠PSC系，并且評(píng)價(jià)其在介導(dǎo)胰腺纖維化、炎癥及免疫功能的作用。 方法：通過采用Rous肉瘤病毒啟動(dòng)子和增強(qiáng)子驅(qū)動(dòng)SV40大T抗原在大鼠原代PSC的表達(dá)建立永生化大鼠PSC系（RP-2）。采用免疫化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞骨架蛋白desmin、整合素α5β1或TLR4的表達(dá)；采用Western blot方法檢測(cè)desmin、Collagen I、MMP-1、MMP-2、TIMP-2以及CD14的表達(dá)。采用實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）法檢測(cè)desmin、Collagen I、IL-1和IL-6mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子分泌水平。通過細(xì)胞黏附、遷移和增殖實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞功能。 結(jié)果：通過應(yīng)用RSV啟動(dòng)子和增強(qiáng)子驅(qū)動(dòng)SV40大T抗原的表達(dá)建立了一個(gè)穩(wěn)定的永生化大鼠PSC系（RP-2）。這個(gè)細(xì)胞系已經(jīng)在體外穩(wěn)定培養(yǎng)傳代超過一年，RP-2細(xì)胞保留了原代激活PSC的形態(tài)和基因表達(dá)特征，，該細(xì)胞系呈纖維母細(xì)胞樣表型，且持續(xù)表達(dá)desmin。RP-2細(xì)胞可表達(dá)調(diào)節(jié)胰腺纖維化的主要基因，包括TGF-β1，PDGF，CTGF，Collagen I，F(xiàn)N以及參與基質(zhì)重構(gòu)的蛋白質(zhì): MMP-1、MMP-2或TIMP-2。在TGF-β1作用下，這種細(xì)胞的1型膠原、CTGF和TIMP-2的表達(dá)增加，而MMP-1、MMP-2的表達(dá)減少。RP-2細(xì)胞具有PSC典型的功能，包括增殖、黏附和遷移，其中對(duì)FN的黏附和遷移是通過整合素α5β1介導(dǎo)。TLR4和其應(yīng)答基因包括促炎因子（IL-1, IL-6, TNF-α）和趨化因子（MCP-1, MIP-1α, Rantes）由RP-2細(xì)胞產(chǎn)生并且在LPS作用下表達(dá)增強(qiáng)。LPS可誘導(dǎo)RP-2細(xì)胞IL-1和IL-6mRNA的表達(dá)并且可被MyD88抑制劑阻斷。 結(jié)論：本研究成功建立了穩(wěn)定的大鼠PSC系RP-2細(xì)胞。RP-2細(xì)胞為研究PSC在胰腺纖維化、炎癥和胰腺免疫發(fā)病機(jī)制方面提供了一個(gè)新的工具。
[Abstract]:Background and purpose: pancreatic stellate cells (PSC) play a crucial role in the pathogenesis of pancreatic fibrosis. Recent studies have shown that PSC has the function of pancreatic exocrine and has functions of progenitor cells, immune cells and intermediary cells. Because of the lack of stable PSC lines that can be used to study its various functions in vitro, the extensive and in-depth study of PSC is limited. More and more evidence shows that desmin is a specific cytoskeleton protein of PSC, which is only expressed in some PSC. The aim of this study is to establish an immortalized PSC rat with positive expression of desmin and evaluate its role in mediating pancreatic fibrosis, inflammation and immune function.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R576

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 ;Roles of Smad3 and Smad7 in rat pancreatic stellate cells activated by transforming growth factor-beta 1[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年05期

2 ;The expression of toll-like receptor 2, 4 of livers in mice with systemic inflammatory response syndrome[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2006年01期

3 ;Hyaluronic acid fragments evoke Kupffer cells via TLR4 signaling pathway[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年02期

本文編號(hào)：1339150