本文關(guān)鍵詞：鋅α2糖蛋白對LPS干預(yù)的HepG2的JNK炎癥信號通路的影響

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【摘要】：目的:重組鋅alpha2糖蛋白(Zinc alpha2 glycoprotein,ZAG)質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,觀察Hep G2細(xì)胞過表達(dá)ZAG后對肝細(xì)胞的腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)表達(dá)的影響以及探討脂多糖(LPS)干預(yù)對Hep G2細(xì)胞和Hepa1-6細(xì)胞的ZAG、法尼酯受體(Farnesoid X receptor,FXR)、脂肪細(xì)胞因子Adiponectin表達(dá)的影響。方法:1.體外培養(yǎng)Hep G2細(xì)胞,用濃度分別為1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml的ZAG質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞48小時后,Western blot檢測ZAG蛋白表達(dá)情況。2.體外培養(yǎng)Hep G2細(xì)胞,用過表達(dá)ZAG質(zhì)粒(p IRES2-h ZAG)和空白質(zhì)粒(p IRES2-GFP)分別經(jīng)脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞48h后,Western blot檢測TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)情況。3.體外培養(yǎng)Hep G2以及Hepa1-6細(xì)胞,用LPS分別干預(yù)Hep G2和Hepa1-6細(xì)胞0h、1/2h、1h、2h、6h、12h、24h、48h,Western blot檢測ZAG、FXR以及Adiponectin蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.4μg/ml組ZAG質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞后,能顯著增加ZAG蛋白的表達(dá)。2.與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組中炎癥因子TNF-α表達(dá)降低(p0.05),炎癥因子IL-1β表達(dá)降低(p0.01)。3.用LPS分別干預(yù)Hep G2和Hepa1-6細(xì)胞不同時間,在LPS(1μg/ml)干預(yù)下,Hep G2細(xì)胞中ZAG在干預(yù)1h表達(dá)增加(p0.05),干預(yù)12h、24h、48h時ZAG表達(dá)明顯降低(p0.01);FXR在12h、24h、48h表達(dá)降低(p0.05);Adiponectin在6h、12h、24h、48h表達(dá)明顯降低(p0.01)。而Hepa1-6細(xì)胞中ZAG在LPS干預(yù)1h表達(dá)增加(p0.05),干預(yù)6h、12h、24h、48h表達(dá)降低(p0.05);FXR在12h、24h、48h表達(dá)降低(p0.05);Adiponectin在6h、12h、24h、48h表達(dá)降低(p0.05)。結(jié)論:1.過表達(dá)ZAG可降低Hep G2細(xì)胞中炎癥因子TNF-α及IL-1β蛋白表達(dá)。2.LPS干預(yù)Hep G2細(xì)胞和Hepa1-6細(xì)胞,ZAG、FXR、Adiponectin均在干預(yù)12小時以后表達(dá)減少。目的:探討鋅alpha2糖蛋白ZAG對LPS誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞JNK炎癥信號通路的影響。方法:1.體外培養(yǎng)Hep G2細(xì)胞和Hepa1-6細(xì)胞,用LPS分別干預(yù)對照組、空白質(zhì)粒組、ZAG過表達(dá)組12小時,Western blot檢測ZAG、FXR、Adiponectin蛋白的表達(dá)情況。2.用六孔板培養(yǎng)Hep G2細(xì)胞,過表達(dá)ZAG質(zhì)粒和空白質(zhì)粒分別經(jīng)脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞48h后,并分別用LPS以及LPS聯(lián)合JNK抑制劑SP600125干預(yù),Western blot檢測JNK、P-JNK、C-jun、P-cjun蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.Western blot結(jié)果顯示:與control組相比,LPS組以及LPS+p IRES2-GFP組ZAG表達(dá)明顯降低(p0.01),與LPS+p IRES2-GFP組相比,LPS+p IRES2-h ZAG組ZAG表達(dá)增加(p0.05);與control組相比,LPS組以及LPS+p IRES2-GFP組FXR及Adiponectin表達(dá)降低(p0.05)。2.Western-blotting結(jié)果顯示:與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組各組JNK蛋白表達(dá)無明顯變化(p0.05),在p IRES2-GFP組中,與control組相比,LPS干預(yù)組中P-JNK蛋白表達(dá)增加(p0.05),LPS+SP600125聯(lián)合干預(yù)組與LPS干預(yù)組相比,P-JNK蛋白表達(dá)降低(p0.05),與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組中LPS+SP600125干預(yù)組P-JNK蛋白表達(dá)降低(p0.05)。3.Western-blotting結(jié)果顯示,在p IRES2-GFP組中,與control組相比,LPS干預(yù)組中C-jun及P-cjun蛋白表達(dá)增加(p0.05),LPS+SP600125聯(lián)合干預(yù)組與LPS干預(yù)組相比,C-jun及P-cjun蛋白表達(dá)降低(p0.05),與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組中LPS+SP600125干預(yù)組C-jun及P-cjun蛋白表達(dá)降低(p0.05)。結(jié)論:1.過表達(dá)ZAG能降低P-JNK、C-jun及P-cjun蛋白的表達(dá),在JNK抑制劑SP600125和LPS聯(lián)合作用下,ZAG能增強(qiáng)JNK抑制劑SP600125的抑制作用,從而降低P-JNK、C-jun及P-cjun蛋白表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5

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本文編號：1222390