本文關鍵詞：Arkadia對肝纖維化SnoN蛋白降解作用的體內外實驗研究

  更多相關文章： 肝纖維化 逆轉 肝星狀細胞 SnoN Arkadia 纖連蛋白FN

【摘要】：背景與目的:肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展成肝硬化及肝功能失代償?shù)墓餐A段,但其發(fā)病機制至今尚未完全闡明,且總體療效仍不理想。因此需要進一步深入探討肝纖維化發(fā)生發(fā)展的分子機制,為尋找干預肝纖維化進展和逆轉肝纖維化的有效靶點提供實驗依據(jù)。轉化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是目前公認促肝纖維化最有效、最有力的細胞因子,Smad信號是其發(fā)揮作用的主要通路。而Sno N蛋白能阻斷TGF-β1/Smad信號,抑制肝纖維化。我們前期研究發(fā)現(xiàn),不同肝纖維化動物模型及病人纖維化肝組織中,Sno N蛋白減少,而Sno N基因轉錄水平未改變,可能與泛素化降解Sno N蛋白的關鍵酶Arkadia有關,但其作用和機制尚不清楚。因而本研究從體內及體外兩方面著手,探Arkadia降解Sno N的分子機制。本研究將有利于深入闡明肝纖維化發(fā)病機制。方法:(1)體內研究:大鼠適應性飼養(yǎng)(標準飼料,自由飲水)1周,采用隨機數(shù)值表法進行分組,CCl4(carbon tetrachloride)肝纖維化模型組(model)43只,腹腔注射50%的CCl4橄欖油溶液0.15 ml/100 g體重,2次/周,共8周,8周后停止注射,繼續(xù)飼養(yǎng)4周,建立肝纖維化逆轉模型,大鼠分別于第2、4、6、8、10、12周處死;對照組7只大鼠腹腔注射等量生理鹽水,于第8周一并處死,并留取肝臟標本,心臟取血,收集血清。大體標本觀察、HE染色、Masson染色和血清生化檢測確定大鼠肝纖維化模型是否成功,通過Western Blot技術檢測Arkadia、Sno N、FN、TGF-β1、Collagen-Ⅰ、α-SMA等的表達。實時熒光定量PCR(quantitative real time PCR,q RT-PCR)檢測Arkadia、FN的表達。免疫組織化學檢測Arkadia、Sno N、FN的表達。(2)體外研究:用10 ng/ml的TGF-β1刺激肝星狀細胞(hepatic stellate cells,HSC),分別在2、6、12、24及48小時(hour,h)收集細胞。用不同濃度(0ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml)的TGF-β1刺激HSC細胞,12h后收集細胞。細胞免疫熒光法定位檢測Arkadia、Sno N、FN的表達。Western blot及實時熒光定量PCR檢測Arkadia、FN的表達。結果:大體標本觀察、HE染色、Masson染色和血清生化檢測結果提示CCl4導致的化學性肝纖維化大鼠模型及其逆轉模型復制成功;纖維化肝組織中FN等m RNA表達上調;隨纖維化病程進展FN、TGF-β1、Collagen-Ⅰ、α-SMA等表達增加。Sno N蛋白在肝纖維化組織中表達減少,Arkadia蛋白則表達增多。TGF-β1刺激的HSC-T6細胞中,Arkadia及FN隨著刺激濃度的升高及時間的延長,表達逐漸增多,并在濃度為10ng/ml及12h時,表達最多。結論:Arkadia蛋白在纖維化肝組織中表達增多,Sno N蛋白表達減少。肝纖維化在停止損傷因素后可發(fā)生逆轉,且Arkadia及Sno N蛋白的表達也會發(fā)生相應變化。
【學位授予單位】：首都醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.2

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒圣強,齊宗利;91例非老年慢性乙型肝炎肝纖維化的診斷[J];中國基層醫(yī)藥;2001年04期

2 曾民德;肝纖維化的診斷和治療[J];肝臟;2001年S1期

3 田養(yǎng)年,鄧淑玲,張武智;中西醫(yī)結合治療肝纖維化的新進展[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2001年S1期

4 曾民德;肝纖維化的治療及其療效評估[J];中國中西醫(yī)結合雜志;2002年05期

5 謝彥華,劉春榮;基質金屬蛋白酶抑制劑與肝纖維化[J];臨床薈萃;2002年08期

6 李清華,戰(zhàn)淑慧,卞魯巖,秦成勇,勞萍;轉化生長因子-β_1和纖溶酶原激活物抑制物-1在肝纖維化中的作用及關系[J];中華消化雜志;2004年02期

7 王吉耀;重視肝纖維化的基礎與臨床研究[J];中華醫(yī)學雜志;2005年15期

8 陸倫根,曾民德;肝纖維化的診斷和評估[J];中華肝臟病雜志;2005年08期

9 時昭紅,鄧長生;肝纖維化的防治研究進展[J];國外醫(yī)學(內科學分冊);2005年03期

10 劉克洲;侯偉;;肝纖維化的治療策略[J];中國中西醫(yī)結合雜志;2006年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉勇鋼;盧建華;;瘦素與肝纖維化關系及研究方法探討[A];中華醫(yī)學會病理學分會2009年學術年會論文匯編[C];2009年

2 袁鳳儀;;淺議中西醫(yī)防治肝纖維化的研究[A];貴州省中西醫(yī)結合學會2010年消化系病學術交流會暨非酒精性脂肪肝研究進展學習班資料匯編[C];2010年

3 杜緒勝;;肝纖維化的中西醫(yī)結合研究現(xiàn)狀[A];中國中西醫(yī)結合學會第十六次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2004年

4 趙新顏;王寶恩;賈繼東;;先天性肝纖維化的臨床病理特點[A];中華醫(yī)學會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學術會議論文匯編[C];2005年

5 李驥;董培紅;金益輝;盧明芹;潘發(fā)奮;王幫松;陳永平;;維生素D受體基因多態(tài)性與肝纖維化關系初步研究[A];第九次浙江省中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2006年

6 張磊;李俊;黃成;呂雄文;金涌;朱鵬禮;;肝纖維化逆轉的機制研究[A];第十屆全國生化與分子藥理學術會議論文摘要匯編[C];2007年

7 徐葉進;;胰島素樣生長因子-1在大鼠肝纖維化組織中的表達及意義[A];2012年浙江省醫(yī)學會肝病、感染病學學術年會暨浙江省感染科醫(yī)師學術年會論文集[C];2012年

8 賈繼東;;肝纖維化的發(fā)生機理及治療進展[A];第6屆全國疑難及重癥肝病大會論文集[C];2011年

9 楊從意;陳英杰;程晶;李群;周大橋;;淺談肝纖維化的臨床研究進展[A];中華中醫(yī)藥學會第十三屆內科肝膽病學術會議論文匯編[C];2008年

10 郭宇;曾華強;羅時兵;何麗珍;;中西醫(yī)結合診療肝纖維化的幾點思考[A];第十八次全國中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張昀;肝纖維化可以治療[N];健康報;2005年

2 陳斌;肝纖維化可以逆轉嗎？[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

3 范又;肝病專家指出治療肝纖維化中醫(yī)藥療效世界領先[N];光明日報;2007年

4 陳黎明;肝纖維化[N];家庭醫(yī)生報;2006年

5 通訊員 陳麗霞邋王懷民 記者 趙鳳華;黃連素可能治肝纖維化[N];科技日報;2008年

6 蔣明邋通訊員 陳麗霞 王懷民;黃連素治療肝纖維化有效果[N];健康報;2008年

7 健康時報記者 劉橋斌;測肝纖維化免穿刺[N];健康時報;2009年

8 解放軍302醫(yī)院肝纖維化無創(chuàng)診療中心 陳國鳳 黃顯斌 整理;肝纖維化檢查進入無創(chuàng)時代[N];健康報;2009年

9 第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院教授 謝渭芬　整理 王根華;阻斷肝纖維化發(fā)展的鏈條[N];健康報;2010年

10 黃丁毅;福瑞股份：肝纖維化專科面對“做大”命題[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李俊峰;單采血漿所致慢性HCV感染20年自然史及其鞘脂組學研究[D];蘭州大學;2015年

2 杜靜華;微小RNAs差異表達對非酒精性脂肪性肝炎相關肝纖維化的影響及分子調控機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2016年

3 李紅;探討海珠益肝方從痰論治肝纖維化的作用及機制研究[D];湖北中醫(yī)藥大學;2016年

4 涂曉龍;miR-30和lincRNA-p21調控肝纖維化的作用機制研究[D];南京大學;2016年

5 朱穎煒;轉染TIMP-1-shRNA基因的骨髓間充質干細胞治療大鼠肝纖維化[D];蘇州大學;2016年

6 沈亞琪;肝纖維化動物模型的功能磁共振定量研究及部分臨床應用[D];華中科技大學;2010年

7 劉燕;間充質干細胞在肝纖維化形成中的作用及機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

8 強暉;肝纖維化相關基因的篩選及其功能初步研究[D];第二軍醫(yī)大學;2003年

9 羅燕軍;銀杏葉提取物對大鼠肝纖維化的防治作用及其機制[D];武漢大學;2004年

10 徐佳;肝臟特異性磁共振增強成像定量評價大鼠肝纖維化與肝功能[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張麗君;水飛薊素聯(lián)合吡喹酮治療小鼠血吸蟲病肝纖維化的實驗研究[D];湖北科技學院;2015年

2 張美;肝纖維化無創(chuàng)模型對聚乙二醇干擾素α治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎療效的預測價值[D];福建醫(yī)科大學;2015年

3 樓印fE;慢性乙型肝炎肝纖維化無創(chuàng)模型比較研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 高永振;基于超聲射頻時間序列的早期肝纖維化檢測及程度識別研究[D];華南理工大學;2015年

5 李旭;γ-谷氨酰轉肽酶（γ-GT）與乙肝表面抗原定量比值對慢性乙型肝炎病毒感染患者纖維化的評價[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

6 陳小霞;EZH2在肝纖維化中的作用及其部分機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

7 謝力駿;2型糖尿病對NAFLD患者肝纖維化進展相關性研究[D];廣西醫(yī)科大學;2015年

8 曾祥華;慢性乙型肝炎肝纖維化的無創(chuàng)診斷與機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 馮文強;SIRT1在小鼠肝纖維化中的作用及其相關分子的組學研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

10 張靜雯;間充質干細胞通過調控枯否細胞M1型和M2型改善肝纖維化的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

，

本文編號：1188680