本文關鍵詞：體外誘導生成人誘導性多能干細胞及向肝細胞樣細胞分化的研究

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【摘要】：研究背景：目前針對肝衰竭的治療手段中最有效的為肝臟移植治療,但由于供體的嚴重短缺,無法進行普遍推廣。人工肝支持系統(tǒng)可以暫時替代肝臟功能,幫助病人渡過肝衰竭危險期等待肝細胞再生,或維持病人生存至得到合適的供體進行肝移植。生物人工肝是目前認為最理想的人工肝,但其發(fā)展受限于肝細胞來源問題。干細胞由于具有轉化為各種類型組織細胞的能力,可能為人工肝治療的肝細胞新的來源。胚胎干細胞可具有良好的多潛能性,可分化為多種人體組織細胞,但其應用受到倫理學的限制。自體骨髓間充質(zhì)干細胞和外周血干細胞獲取數(shù)量有限,難以建立細胞系,不能滿足生物型人工肝所需要擴增的數(shù)量及也不夠穩(wěn)定。誘導性多能干細胞與胚胎干細胞同樣,具有自我更新、增殖和分化的特性,卻避免了應用胚胎干細胞研究所需要面臨的倫理問題和法律問題,可以避免目前常用的異種及腫瘤肝細胞應用于生物人工肝的主要缺點,可能成為治療終末期肝衰竭新的肝細胞來源,其臨床應用將具有廣闊的前景。目的：將人包皮成纖維細胞誘導為ips細胞,進一步誘導為肝細胞樣細胞,為人工肝支持治療提供新的肝細胞來源。方法：以逆轉錄病毒為載體將Oct4, Sox2, Klf4和c-Myc因子導入人包皮成纖維細胞中,在體外應用hES細胞專用培養(yǎng)體系,培養(yǎng)病毒感染后體細胞,促使其誘導為iPS細胞。進一步通過AP染色、免疫熒光染色,核型鑒定、類胚體形成、臍胎瘤形成等實驗鑒定所誘導的iPS細胞具有類似ES細胞的全能性。對實驗中所獲得的ips細胞,在體外經(jīng)加入不同的刺激因子,誘導ips細胞先分化為內(nèi)胚層細胞,進而分化為肝細胞樣細胞。誘導過程中各階段的標志物經(jīng)免疫熒光染色及流式染色驗證分化效率。獲得的肝細胞樣細胞經(jīng)Elisa方法檢測ALB的分泌量,PAS染色檢測糖原貯存功能,RT-PCR及Real-time PCR檢測特異性基因的表達。誘導的ips細胞經(jīng)熒光標記后經(jīng)尾靜脈注射入急性肝損傷的C57小鼠體內(nèi),了解ips細胞是否對肝損傷有治療作用。結果：成功從人包皮成纖維細胞誘導出ips細胞,鑒定其有類似ES細胞的多潛能性,對實驗中所獲得的ips細胞,在體外經(jīng)加入不同的刺激因子,誘導獲得了具有成熟肝細胞的功能的肝細胞樣細胞。誘導的ips細胞經(jīng)熒光標記后經(jīng)尾靜脈注射入急性肝損傷的C57小鼠體內(nèi),對肝功能損傷具有一定的恢復作用。結論：人包皮成纖維細胞可誘導為ips細胞,進一步誘導為肝細胞樣細胞,可能為生物人工肝治療衰竭潛在的肝細胞來源。
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.3

【共引文獻】

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