本文關(guān)鍵詞：梗阻性黃疸大鼠血清對(duì)肝細(xì)胞模型IRE1表達(dá)的影響與中藥的作用機(jī)制研究

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【摘要】：目的:通過研究不同血清干預(yù)后大鼠正常肝細(xì)胞中IRE1α的表達(dá)變化,探討梗阻性黃疸肝損傷的發(fā)生機(jī)制及中藥茵陳蒿湯對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制,為臨床上梗阻性黃疸患者使用清熱利濕中藥提供理論依據(jù)。方法:1、選擇30只成年雄性SD大鼠,體重(270-300)g,動(dòng)物級(jí)別為清潔級(jí),隨機(jī)分為三組:(1)梗阻性黃疸組(O組)10只;(2)假手術(shù)對(duì)照組(S組)10只;(3)茵陳蒿湯灌胃組(Y組)10只。S組僅行手術(shù)探查、分離膽管,但不予膽管結(jié)扎,O組先行手術(shù)探查、分離膽管,然后采用雙重線結(jié)扎法建立梗阻性黃疸模型,Y組采用茵陳蒿湯灌胃(每次劑量1m L/100g體重),三組均于術(shù)后5d經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,部分血液標(biāo)本:檢測(cè)比較各組動(dòng)物血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)指標(biāo)含量;其余血液標(biāo)本離心后保留血清備用。2、選取大鼠正常肝細(xì)胞系BRL-3A,購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。分為A、B、C三組,其中(1)A組為加入含正常大鼠血清的培養(yǎng)基;(2)B組為加入含梗阻性黃疸大鼠血清的培養(yǎng)基;(3)C組為加入含梗阻性黃疸大鼠血清及茵陳蒿湯灌胃大鼠血清的培養(yǎng)基。分別于6h、24h、48h取材,離心后取肝細(xì)胞及培養(yǎng)液上清。分別標(biāo)記為A6h、A24h、A48h、B6h、B24h、B48h、C6h、C24h、C48h。肝細(xì)胞應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(western blot)測(cè)定肝組織中IRE1α蛋白表達(dá)變化,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)大鼠肝組織IRE1α基因表達(dá)情況;培養(yǎng)液上清測(cè)量ALT、AST含量。結(jié)果:1、生化指標(biāo):(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)造模取血清部分:O組TBIL、DBIL、ALT、AST值較正常值明顯升高,分別S組對(duì)比均明顯升高,差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),大鼠梗阻性黃疸模型建立成功。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分培養(yǎng)液測(cè)定ALT、AST:以A組為對(duì)照組,B組及C組的ALT、AST水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的均高于A組(P0.05);與B比較,C組的ALT、AST水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的均低于B組(P0.05)。2、采用western blot檢測(cè)大鼠肝細(xì)胞中IRE1α:在蛋白表達(dá)水平上,以Actin為內(nèi)參。以A組為對(duì)照組,B組及C組的IRE1α表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的均高于A組(P0.05);與B比較,C組的IRE1α表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的均低于B組(P0.05)。3、R-T PCR檢測(cè)大鼠肝細(xì)胞中IRE1αm RNA基因:以A組為對(duì)照組,B組及C組的IRE1αm-RNA表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的均高于A組(P0.05);與B比較,C組的IRE1αm-RNA表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的均低于B組(P0.05)。結(jié)論:1、正常大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)過程中加入梗阻性黃疸大鼠血清能夠成功制造肝損傷模型。由IRE1α-JNK介導(dǎo)ERS途徑的肝細(xì)胞凋亡,是梗阻性黃疸引起肝損傷的可能機(jī)制。2、正常大鼠肝細(xì)胞梗阻性黃疸肝損傷模型中加入茵陳蒿湯含藥血清仍能改善肝功能,可能是通過抑制IRE1α蛋白的過度激活,從而降低ERS反應(yīng),進(jìn)而改善肝細(xì)胞因梗阻性黃疸血清而引起的肝功能異常。3、針對(duì)臨床上梗阻性黃疸患者的治療,合理的辯證的選取清熱利濕中藥(茵陳蒿湯)作為輔助療法,可以更好的降低相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生率,提高臨床治療效果,促進(jìn)患者的肝功能恢復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575
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本文編號(hào)：1138969