本文關鍵詞：乙肝病毒基因組序列擴增的條件優(yōu)化和結果分析

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【摘要】：目的優(yōu)化乙型肝炎病毒(HBV)不同長度基因片段PCR擴增條件,為后續(xù)機制研究提供實驗基礎。方法運用PCR或巢式PCR(Nested PCR)方法擴增6例臨床乙肝患者HBV DNA,針對特異性目的片段,通過優(yōu)化Mg2+濃度、引物濃度、Taq酶用量、DMSO濃度等,獲得特異性擴增條帶,PCR產(chǎn)物直接測序并使用CHROMAS、MEGA等生物學軟件進行結果分析。結果通過綜合分析各種實驗條件對PCR擴增結果的影響,最終確認在50μL擴增體系中,2.5 mmol/L Mg2+、200 nmol/L特異性引物、1.5 U Taq酶、56℃退火在本實驗室可獲得良好的擴增效果,適量二甲基亞砜(DMSO)可減少非特異性干擾,同時建議對短片段可酌量減少Taq酶使用量。生物信息學分析示6例HBV感染標本中1例為B基因型,5例為C基因型,共發(fā)現(xiàn)S基因21個核酸變異及9個氨基酸可改變。結論建立了適合本實驗室的HBV DNA擴增體系以及后續(xù)生物信息學分析方法,明確了不同的擴增體系條件對PCR擴增效果具有重要影響。
【作者單位】： 安徽省血液中心;福建省血液中心;江西省血液中心;解放軍第105醫(yī)院;
【關鍵詞】： 乙型肝炎病毒 PCR 巢式PCR 方法學優(yōu)化 生物信息學
【分類號】：R512.62;R440
【正文快照】： #共同第1作者;△通信作者:呂蓉(1969.06-),女,副主任技師,研究領域:輸血免疫學相關檢測,電話:13645602742,Email:lvrong612@126.com乙型肝炎病毒(HBV)是引起病毒性肝炎的主要病原體之一,由其引起的傳染病——乙型肝炎感染呈世界性分布,嚴重危害人類生命健康,成為重要的社會公

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1 曹彬;張曉棠;吳星;;沈陽地區(qū)乙型肝炎病毒基因型與臨床特征相關性的分析[J];沈陽醫(yī)學院學報;2009年01期

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1 汪娟;安徽省部分地區(qū)乙型肝炎分子流行病學初步研究[D];安徽醫(yī)科大學;2011年

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1 徐歲;一種新的可視化環(huán)介導等溫擴增技術檢測瘧原蟲的研究及其應用評價[D];江蘇省血吸蟲病防治研究所;2012年

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本文編號：1112439