本文關(guān)鍵詞：CLDN4在喉鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的研究

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【摘要】：喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一,其中以鱗狀細(xì)胞癌最為多見。目前研究顯示,緊密連接蛋白CLDN4在多種上皮來源腫瘤中表達(dá)異常,研究發(fā)現(xiàn),在胰腺癌、乳腺癌及胃癌中CLDN4表達(dá)明顯上調(diào),而在膀胱癌、腎細(xì)胞癌中CLDN4的表達(dá)下調(diào),因此推測其表達(dá)的改變在多種上皮源性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,但其在喉癌中的表達(dá)尚未見報道。據(jù)報道,DNA甲基化可以調(diào)節(jié)CLDNs的表達(dá),甲基化的DNA可與Mecp-2結(jié)合,導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄的抑制。CLDN4啟動子區(qū)域的甲基化可導(dǎo)致卵巢癌及膀胱癌中CLDN4基因沉默,但在喉癌中CLDN4的表達(dá)是否受到DNA甲基化的調(diào)節(jié)目前仍不清楚。目的:檢測CLDN4在喉癌組織中的表達(dá),并且進(jìn)一步探討其表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制及在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:采用免疫組化法檢測95例喉鱗狀細(xì)胞癌和95例癌旁組織中CLDN4及Mcep-2的表達(dá),并進(jìn)一步分析其與腫瘤分化程度的關(guān)系及二者之間的相關(guān)性;同時用10μM 5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-aza-dc)作用喉鱗癌細(xì)胞系hep-2細(xì)胞,通過RT-PCR和western blot法檢測5-aza-dc作用6h、12h及24h對CLDN4 mRNA和蛋白表達(dá)的影響,并通過劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)檢測5-aza-dc作用12h對hep-2細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的影響。結(jié)果:喉癌組織中CLDN4表達(dá)下調(diào),且其表達(dá)與腫瘤的分化程度正相關(guān);喉癌組織中Mecp-2表達(dá)上調(diào),其表達(dá)與腫瘤的分化程度無明顯相關(guān)性;喉癌組織中CLDN4的表達(dá)與Mecp-2的表達(dá)相關(guān);5-aza-dc作用hep-2細(xì)胞后可可以上調(diào)CLDN4的表達(dá),并使hep-2細(xì)胞的遷移和侵襲能力下降。結(jié)論:1.CLDN4在喉癌組織中表達(dá)下調(diào),并與Mecp-2的表達(dá)相關(guān);2.5-aza-dC可以上調(diào)hep-2細(xì)胞中CLDN4的表達(dá),從而抑制了細(xì)胞的遷移及侵襲能力。3.CLDN4表達(dá)下調(diào)可能與DNA甲基化有關(guān),并可能促進(jìn)了喉癌的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：喉鱗狀細(xì)胞癌 CLDN4 DNA 甲基化
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-12
• 第一章 前言12-17
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法17-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17
• 2.2 主要試劑及來源17-18
• 2.3 主要儀器18-19
• 2.4 引物設(shè)計(jì)合成及一抗19
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 2.5.1 免疫組化法分析CLDN4及mecp-2 在組織中的表達(dá)19-20
• 2.5.2 細(xì)胞培養(yǎng)20-21
• 2.5.3 RT-PCR方法檢測hep-2 細(xì)胞株中CLDN4的表達(dá)21-22
• 2.5.4 Western blot方法檢測hep-2 細(xì)胞株中CLDN4的表達(dá)22-23
• 2.5.5 使用 5-aza-dc對hep-2 細(xì)胞株進(jìn)行去甲基化處理23
• 2.5.6 RT-PCR 方法檢測5-aza-dc處理后hep-2細(xì)胞株中CLDN4的表達(dá)23
• 2.5.7 Western blot 方法檢測5-aza-dc處理后hep-2細(xì)胞株中CLDN4的表達(dá)23
• 2.5.8 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測5-aza-dc處理后hep-2細(xì)胞株的遷移能力23-24
• 2.5.9 transwell實(shí)驗(yàn)檢測5-aza-dc處理后hep-2細(xì)胞株的侵襲能力24-25
• 2.5.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-34
• 3.1 CLDN4及Mecp-2 在組織中的表達(dá)結(jié)果26-29
• 1. CLDN4在喉癌組織中的表達(dá)26
• 2. CLDN4與腫瘤分化程度的相關(guān)性分析26-27
• 3. Mecp-2 在喉癌組織中的表達(dá)27-28
• 4. Mecp-2 與腫瘤分化程度相關(guān)性分析28-29
• 5. 喉癌組織中CLDN4表達(dá)與Mecp-2 表達(dá)的相關(guān)性分析29
• 3.2 5-aza-dc 對 hep-2 細(xì)胞 CLDN4 表達(dá)的影響29-31
• 3.2.1 RT-PCR 法檢測 5-aza-dc 對 hep-2 細(xì)胞 CLDN4 mRNA 表達(dá)的影響29-30
• 3.2.2 Western blot 法檢測 5-aza-dc 對 hep-2 細(xì)胞 CLDN4 蛋白表達(dá)的影響30-31
• 3.3 5-aza-dc上調(diào)CLDN4對hep-2細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響31-34
• 3.3.1 5-aza-dc上調(diào)CLDN4對hep-2細(xì)胞遷移能力的影響31-32
• 3.3.2 5-aza-dc上調(diào)CLDN4對hep-2細(xì)胞侵襲能力的影響32-34
• 第四章 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 作者簡介及在學(xué)期間所發(fā)表的論文45-46
• 致謝46

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