發(fā)布時間：2017-09-17 04:04

  本文關(guān)鍵詞：18β-甘草次酸對脂多糖誘導(dǎo)鼻黏膜炎癥的影響

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【摘要】：鼻息肉(nasal polyps, NP)是鼻腔鼻竇黏膜組織高度水腫的慢性炎性病變,常伴有慢性鼻-鼻竇炎,多數(shù)學者多傾向認為黏膜的慢性炎性反應(yīng)是由多因素如細菌、真菌、解剖變異等誘發(fā)鼻腔外側(cè)壁黏膜炎癥所致。炎癥是對創(chuàng)傷和感染的生理性和保護性反應(yīng),而炎性細胞的長期浸潤可促使細胞因子(如HMGB1、TNF-α、IL-5、IL-8等)相互作用,鼻黏膜局部炎癥反應(yīng)不斷擴大。HMGB1屬非組蛋白核蛋白,參與細胞分化、DNA的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制與修復(fù)等,屬細胞核的成分,在胞外時發(fā)揮著炎癥因子的作用。在鼻息肉組織中HMGB1表達水平較正常鼻黏膜組織增高,LPS誘導(dǎo)可促使細胞核內(nèi)的HMGB1主動釋放至細胞質(zhì)及細胞外。沉默信息調(diào)節(jié)因子是依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的第三類組蛋白去乙�；�,Sirtuins蛋白家族參與炎癥機制的上游信號通路,在呼吸道細胞的細胞衰老、病原感染中發(fā)揮著重要的作用。本研究通過觀察鼻息肉組織和正常鼻黏膜組織中Sirt6 (silent information regulator 2 related enzyme 6)的表達,脂多糖誘導(dǎo)體外原代鼻黏膜上皮細胞后18β-甘草次酸對Sirt6 和 HMGB1的影響情況,以初步探討Sirt6蛋白在正常鼻黏膜和鼻息肉中的作用,18β-甘草次酸是否在鼻黏膜上皮細胞中發(fā)揮抗炎機制。第一部分沉默信號調(diào)節(jié)因子6在鼻息肉中的表達及意義目的：初步探討Sirt6在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達及意義。方法：利用免疫組化和Westem blot方法觀察23例鼻息肉組織及8例正常鼻黏膜組織中Sirt6蛋白分布和表達水平。結(jié)果：1.免疫組化顯示Sirt6在鼻黏膜主要表達在上皮細胞胞核、間質(zhì)細胞及腺細胞,在鼻息肉中的表達弱于正常鼻黏膜;2.Westem blot顯示Sirt6在鼻息肉中的表達量低于正常鼻黏膜。結(jié)論：Sirt6蛋白主要表達在正常鼻黏膜細胞,其水平的降低可能參與鼻息肉的炎性反應(yīng),可作為慢性鼻竇炎伴鼻息肉的治療指標。第二部分18p-甘草次酸對脂多糖誘導(dǎo)鼻黏膜炎癥的影響目的：觀察18p-甘草次酸(GA)對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的鼻黏膜上皮細胞炎癥的影響。方法：收集鼻息肉標本8例,所取標本的患者年齡在19-60歲之間,排除真菌性鼻竇炎、過敏性鼻炎、哮喘、鼻息肉復(fù)發(fā)再次手術(shù)者及其他全身性疾病及免疫學檢查異�；颊�。術(shù)前停用糖皮質(zhì)激素、抗組胺等藥物治療兩周。LPS誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的人鼻息肉上皮細胞48 h后,更換含18p-甘草次酸培養(yǎng)基作用48 h,熒光顯微鏡下觀察Sirt6及HMGB1蛋白在細胞中的表達及細胞形態(tài)變化,Western blot檢測蛋白的表達量。結(jié)果：GA藥物組與空白對照組及LPS誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的人鼻息肉上皮細胞48h后相比,HMGB1表達局限于胞核,Sirt6主要表達與細胞核內(nèi)。Western blot檢測在GA作用后,上皮細胞中Sirt6、HMGB1表達量明顯增加,在1 μmol/L達到高峰值,兩者呈現(xiàn)相關(guān)性。結(jié)論：1 μmol/L的18-β甘草次酸作用LPS誘導(dǎo)的原代人鼻黏膜上皮細胞后,能夠促進Sirt6表達量的增加,并抑制細胞核中HMGB1向胞質(zhì)及胞外的移位和釋放,提示18-p甘草次酸在抑制人鼻黏膜上皮細胞的炎性反應(yīng)中具有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：鼻息肉 沉默信號調(diào)節(jié)因子6 高遷移率族蛋白1 18-β甘草次酸 脂多糖
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R765
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-15
• 參考文獻13-15
• 第一部分 沉默信號調(diào)節(jié)因子6在鼻息肉中的表達及意義15-27
• 一.材料15-16
• 1.研究對象15
• 2.標本處理15
• 3.實驗儀器及設(shè)備15-16
• 4.主要試劑16
• 二.實驗方法16-20
• 2.1 免疫組化17-18
• 2.2 Western blot18-20
• 2.3 統(tǒng)計分析20
• 三.結(jié)果20-22
• 1.正常鼻黏膜與慢性鼻竇炎伴鼻息肉的臨床特點20
• 2.正常鼻炥膜組織和鼻息肉組織中Sirt6的表達及分布20-21
• 3.Western blot檢測Sirt6蛋白的表達21-22
• 四.討論22-25
• 參考文獻25-27
• 第二部分 18β-甘草次酸對脂多糖誘導(dǎo)鼻黏膜炎癥的影響27-43
• 一.材料27-28
• 1.標本27
• 2.實驗儀器及設(shè)備27
• 3.主要試劑及配制27-28
• 二.實驗方法28-31
• 1.人鼻黏膜上皮細胞原代培養(yǎng)28-29
• 2.臺盼藍試劑檢測細胞活力29
• 3.配制GA29
• 4. GA作用LPS誘導(dǎo)原代人鼻炥膜上皮細胞29-30
• 5. MTT法檢測細胞增殖30
• 6.免疫突光染色30
• 7. Western Blot30-31
• 8.統(tǒng)計分析31
• 三.結(jié)果31-37
• 1.人鼻黏膜上皮細胞原代培養(yǎng)及形態(tài)觀察31-33
• 2.GA作用LPS誘導(dǎo)鼻壚膜上皮細胞48h后HMGB1的表達定位33-36
• 3.GA對LPS誘導(dǎo)鼻炥膜炎癥后上皮細胞HMGB1蛋白表達水平的影響36-37
• 四.討論37-40
• 參考文獻40-43
• 文獻綜述43-49
• 參考文獻46-49
• 個人簡歷49-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙干業(yè);韓麗敏;童坦君;;SIRT6功能與疾病研究進展[J];生理科學進展;2014年04期

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本文編號：867142