本文關鍵詞：視網膜色素上皮細胞吞噬功能與MERTK-Ras-肌球蛋白通路關系的研究

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【摘要】：目的:研究視網膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細胞吞噬功能與MERTK受體及其下游信號通路Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白的關系。方法:用視細胞外節(jié)膜盤(rod outer segments,ROS)于37℃孵育離體培養(yǎng)的3~5代C57小鼠RPE細胞,在孵育0、30、60、120、180、240min終止吞噬反應。雙重熒光標記法檢測RPE細胞吞噬動力學;以MERTK及Ras抗體、磷酸化MEK及MLCK抗體應用Western-Blot方法檢測不同孵育時間(30、60、120、180min)MERTK、Ras、MEK及MLCK的激活狀態(tài);以瞬時轉染質粒方法抑制Ras及MERTK基因表達后,再次以Western-Blot方法檢測對應時間MERTK-Ras通路激活狀態(tài)及吞噬功能的變化。結果:C57小鼠RPE細胞吞入ROS發(fā)生在孵育30min,并在3h達到飽和。在吞噬過程中,隨著孵育時間的延長,RPE細胞MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表達水平不斷增多(與對照組相比,P0.05)。Ras及MERTK干擾后的RPE細胞與ROS共孵育(30、60、120、180min)的全過程中,MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表達及ROS的吞人數量始終維持較低水平,僅在孵育180min見到少量ROS吞入;與未轉染RPE細胞相比,siRas-RPE細胞及siMERTK-RPE細胞與ROS共孵育120、180min時,MERTK、Ras、MEK及MLCK的蛋白表達量均明顯減少(P0.05)。結論:Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白通路是鼠RPE細胞吞噬過程中MERTK受體激活的下游信號通路。
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學附屬一院眼科;
【關鍵詞】： 視網膜色素上皮 吞噬 MERTK Ras 肌球蛋白
【基金】：沈陽市科技計劃項目(No.F13-316-1-11)~~
【分類號】：R774.1
【正文快照】： Liaoning Province,China.sunyz91667@sina.com妁METHODS:Cultured 3~5 passage RPE cells of C57BL/6m ouse w ere incubated w ith rod outer segm ents(ROS)suspension(containing ROS 1×107/m l)at 37℃,then cellsw ere rinsed at different tim es(30,60,120,180,240m ，

本文編號：574864