發(fā)布時間：2024-04-14 16:12

　　[研究背景] 研究發(fā)現(xiàn)DNA腫瘤病毒中有些病毒的編碼產(chǎn)物能與宿主細胞內(nèi)抑制細胞生長和促進細胞分化的蛋白結(jié)合,使其失活而發(fā)揮致瘤作用。EBV(Epstein-Barr virus, EBV)可能也具有此作用。我室克隆得到的鼻咽組織相關的特異性表達基因(nashopharynix associated specific, NASG),即短腭、肺及鼻咽上皮克隆(Short Palate, Lung and Nasal epithelium Clone1, SPLUNC1)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)組織及細胞系中表達下調(diào),是一個潛在的鼻咽癌抑瘤基因,初步研究發(fā)現(xiàn)SPLUNC1能促使感染EBV的細胞裂解,啟動補體途徑和抗體依賴細胞介導的細胞毒(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity, ADCC)作用對EBV進行清除,并能通過抑制EBV關鍵基因潛伏膜蛋白1(Latent membrane protein1, LMP1)的表達降低EBV的致瘤能力。miRNA芯片篩查發(fā)現(xiàn)miR-141能受到SPLUNC1的調(diào)...

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮略詞表
第一章 前言
    技術路線
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 菌株和質(zhì)粒載體
        2.1.4 試劑
        2.1.5 引物
        2.1.6 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 構建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SPLUNC1的HNE2細胞系
        2.2.2 HNE2/SPLUNC1和HNE2/GFP細胞感染EBV
        2.2.3 構建瞬時轉(zhuǎn)染SPLUNC1的NP69細胞系
        2.2.4 siRNA干擾SPLUNC1細胞的構建
        2.2.5 miRNA產(chǎn)品轉(zhuǎn)染目的細胞
        2.2.6 ATRA處理細胞
        2.2.7 鼻咽癌標本及鼻咽慢性炎癥對照標本采集
        2.2.8 組織細胞通過顯微切割進行純化
        2.2.9 RT-PCR鑒定培養(yǎng)細胞目的基因mRNA的表達
        2.2.10 miRNA RealTime RT-PCR分析
        2.2.11 采用Western-blot對培養(yǎng)細胞進行目的蛋白質(zhì)鑒定
        2.2.12 methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)
        2.2.13 流式細胞儀分析細胞周期與細胞凋亡率
        2.2.14 免疫熒光試驗
        2.2.15 免疫組化試驗
        2.2.16 裸鼠成瘤試驗
        2.2.17 統(tǒng)計學分析
第三章 結(jié)果
    第一部分 SPLUNC1抑制整合入細胞內(nèi)EBV關鍵基因表達的同時SPLUNC1自身表達受損
        3.1.1 細胞系SPLUNC1表達的篩選
        3.1.2 SPLUNC1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系的構建
        3.1.3 SPLUNC1抑制整合入細胞內(nèi)EBV關鍵基因的表達
        3.1.4 EBV感染細胞導致SPLUNC1的表達降低
    第二部分 SPLUNC1通過miR-141調(diào)控PTEN-Akt通路影響NPC細胞的增殖和凋亡
        3.2.1 SPLUNC1影響NP69細胞和NPC細胞miR-141的表達
        3.2.2 miR-141調(diào)控NP69細胞和NPC細胞PTEN的表達
        3.2.3 SPLUNC1通過miR-141調(diào)控PTEN的表達
        3.2.4 SPLUNC1通過PTEN影響Akt信號通路
        3.2.5 SPLUNC1通過PTEN-Akt通路影響NPC細胞的增殖和凋亡
        3.2.6 裸鼠實驗證實SPLUNC1影響PTEN-Akt信號通路
    第三部分 EBV與SPLUNC1相互影響共同調(diào)控miR-141-PTEN-Akt信號通路
        3.3.1 LMP1通過抑制SPLUNC1影響miR-141-PTEN-Akt信號通路
        3.3.2 NP69-LMP1中恢復SPLUNC1的表達能重新失活Akt通路
第四章 討論
    第一部分 SPLUNC1抑制整合入細胞內(nèi)EBV關鍵基因表達的同時SPLUNC1自身表達受損
    第二部分 SPLUNC1通過miR-141調(diào)控PTEN-Akt信號通路影響NPC細胞增殖和凋亡
    第三部分 EBV與SPLUNC1相互影響共同調(diào)控miR-141-PTEN-Akt信號通路
    第四部分 尚需繼續(xù)研究的課題
結(jié)論
參考文獻
綜述一
    參考文獻
綜述二
    參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間主要的研究成果



本文編號：3954946