發(fā)布時(shí)間：2023-04-25 23:10

　　目的:探討Notch1基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞放療敏感性的影響及其分子機(jī)制。方法:使用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建敲除Notch1基因的CNE-2細(xì)胞(人鼻咽癌細(xì)胞株),通過RT-PCR以及Western blot法檢測(cè)Notch1基因的表達(dá)。經(jīng)不同劑量射線照射處理后,通過計(jì)算各組存活分?jǐn)?shù)(SF),使用Linear-quadratic模型計(jì)算擬合劑量生存曲線,計(jì)算放射增敏比(SER)。以6 Gy為照射劑量,將實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)組:Notch1(+)組、Notch1(-)組、IR+Notch1(+)組和IR+Notch1(-)組。CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況,Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡變化,Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞γH2AX、CyclinD1、Bax、Bcl-2和GAPDH蛋白的表達(dá)差異。結(jié)果:敲除Notch1基因的CNE-2細(xì)胞系構(gòu)建成功。CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示,敲除Notch1可提高鼻咽癌放療敏感性:與IR+Notch1(+)組細(xì)胞相比,IR+Notch1(-)組細(xì)胞增殖和細(xì)胞存活率顯著降低(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI雙染法...

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞系及主要試劑和儀器
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 照射條件
    1.4 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
    1.5 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖及活力
    1.6 Annexin V-FITC/PI雙染法
    1.7 Western blot檢測(cè)
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 運(yùn)用CRISPR/Cas9技術(shù)成功敲除CNE-2細(xì)胞的Notch1基因
    2.2 敲除Notch1的鼻咽癌細(xì)胞放療后細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)下降且放療敏感性增高
    2.3 CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    2.5 Western blot檢測(cè)結(jié)果
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