目的:探討雙向調控時鐘基因Bmal1(brain and muscle arnt-like1)對鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生長的影響及與放療敏感性的關系。方法:采用慢病毒感染方法,構建Bmal1基因CNE1OE(過表達組)、CNE1OENC(過表達對照組)、CNE1sh3(低表達組)、CNE1shNC(低表達對照組)4株細胞,Western blot驗證各組細胞Bmal1蛋白表達情況;4株細胞分別皮下注射相應的4組裸鼠,移植瘤生長后測量其體積;給予6-MeV電子線15 Gy照射裸鼠移植瘤,觀察放療后各組移植瘤體積變化情況。剝離移植瘤,RTPCR及Western blot分別檢測Bmal1、P53、P21 mRNA及蛋白表達情況。結果:Western blot結果提示,與各自對照組對比,CNE1OE組Bmal1蛋白過表達,CNE1sh3組Bmal1蛋白低表達,表明細胞轉染成功。成功構建裸鼠移植瘤模型,CNE1OE組裸鼠移植瘤體積明顯小于CNE1OENC組,CNE1sh3組體積明顯大于CNE1shNC組(P<0.05)。放療后,CNE1OE、CNE1OENC、CNE1shNC組裸鼠移植...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞系
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 實驗動物
    1.2 方法
        1.2.1 Bmal1基因過表達慢病毒載體的構建
        1.2.2基因慢病毒干擾載體的構建
        1.2.3 慢病毒的包裝和病毒滴度的測定
        1.2.4 慢病毒感染目的細胞
        1.2.5 Western blot驗證穩(wěn)轉CNE1細胞中Bmal1蛋白的表達
        1.2.6 裸鼠飼養(yǎng)及接種
        1.2.7腫瘤體積測量與計算
        1.2.8 裸鼠移植瘤放療
        1.2.9 RT-PCR檢測裸鼠移植瘤Bmal1、P53、P21 m RNA表達水平
        1.2.1 0 Western blot檢測裸鼠移植瘤Bmal1、P53、P21蛋白表達
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 Western blot驗證CNE1細胞Bmal1基因過表達及干擾效果
    2.2 構建移植瘤模型后腫瘤生長情況
    2.3 放療后裸鼠移植瘤生長情況
    2.4 RT-PCR檢測Bmal1、P53、P21 m RNA的相對表達
    2.5 Western blot檢測移植瘤Bmal1、P53、P21蛋白的相對表達
3 討論



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