發(fā)布時間：2017-05-16 05:00

  本文關(guān)鍵詞：RNAi介導(dǎo)HMGB1基因沉默對下咽癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和侵襲轉(zhuǎn)移的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究HMGB1基因?qū)ο卵拾┘?xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和侵襲轉(zhuǎn)移的影響,并嘗試探討HMGB對于這一過程的調(diào)控機(jī)制,以期為臨床上治療下咽癌提供新靶點。方法1、利用TGF-β1誘導(dǎo)下咽癌細(xì)胞(Fa Du)發(fā)生EMT,并通過檢索文獻(xiàn)[1-2]確定最佳誘導(dǎo)濃度。將Fa Du細(xì)胞分為Normal組和TGF-β1組,顯微鏡下觀察Fa Du細(xì)胞經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)后的形態(tài)變化。通過細(xì)胞免疫熒光實驗檢測各組細(xì)胞中Vimentin、Snail、HMGB1的表達(dá)情況,以RT-PCR和Western Blot方法檢測HMGB1蛋白和基因在經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)前后的Fa Du細(xì)胞中的表達(dá)情況;2、利用脂質(zhì)體法將siRNA-HMGB1和siRNA-Control轉(zhuǎn)染至FaDu細(xì)胞(分為Normal組、Control組和si HMGB1組),用細(xì)胞免疫熒光、RT-PCR和Western Blot檢測si RNA對HMGB1的抑制作用。采用細(xì)胞免疫熒光觀察Vimentin、Snail、HMGB1的表達(dá)情況,采用RT-PCR方法分析Vimentin、Snail、E-cadherin的表達(dá)水平;Western Blot方法分析轉(zhuǎn)染后下咽癌Fa Du細(xì)胞中RAGE蛋白表達(dá)變化;應(yīng)用創(chuàng)傷愈合實驗檢測Fa Du細(xì)胞遷移能力的改變,Transwell實驗觀察HMGB1基因沉默后Fa Du細(xì)胞侵襲能力變化。結(jié)果1、Fa Du細(xì)胞經(jīng)過TGF-β1誘導(dǎo)后,細(xì)胞形態(tài)由規(guī)則的路磚狀轉(zhuǎn)變?yōu)殚L梭形;細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示,TGF-β1組Fa Du細(xì)胞中的Vimentin、Snail表達(dá)上調(diào);.2、細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示,TGF-β1組細(xì)胞中的HMGB1表達(dá)升高,同時HMGB1在m RNA(P0.01)和蛋白(P0.01)水平的表達(dá)也呈現(xiàn)上調(diào)現(xiàn)象;3、si RNA-HMGB1轉(zhuǎn)染Fa Du細(xì)胞后可在m RNA(P0.05)和蛋白(P0.01)水平抑制HMGB1的表達(dá);4、細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染siRNA-HMGB1后細(xì)胞中的Vimentin、Snail表達(dá)水平降低;5、RT-PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染si RNA-HMGB1后細(xì)胞中的Vimentin(P0.05)、Snail(P0.01)基因表達(dá)下調(diào),而E-cadherin(P0.05)表達(dá)上調(diào);6、Western Blot結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染si RNA-HMGB1后細(xì)胞中的RAGE蛋白表達(dá)下調(diào)(P0.01);7、創(chuàng)傷愈合實驗結(jié)果顯示,si RNA-HMGB1轉(zhuǎn)染Fa Du細(xì)胞后,Fa Du細(xì)胞的遷移能力顯著下降;8、Transwell實驗結(jié)果顯示,si RNA-HMGB1轉(zhuǎn)染Fa Du細(xì)胞后,Fa Du細(xì)胞的侵襲能力明顯降低(P0.01)。結(jié)論1、可以通過TGF-β1誘導(dǎo)構(gòu)建下咽癌細(xì)胞的EMT模型,HMGB1的表達(dá)與下咽癌細(xì)胞EMT形成相關(guān);2、利用RNAi技術(shù)沉默HMGB1的表達(dá)可逆轉(zhuǎn)下咽癌細(xì)胞EMT;3、利用RNAi技術(shù)沉默HMGB1的表達(dá)后,下咽癌細(xì)胞Fa Du的侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯受抑;4、HMGB1可通過與RAGE相互作用調(diào)控下咽癌的侵襲轉(zhuǎn)移;5、HMGB1基因可能為臨床治療下咽癌提供新的分子靶點。
【關(guān)鍵詞】：下咽癌 HMGB1 EMT 侵襲轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文縮略詞表10-13
• 第一章 綜述13-19
• 1.1 下咽癌的研究進(jìn)展13
• 1.2 EMT概述13-16
• 1.2.1 EMT的發(fā)現(xiàn)與分型13-14
• 1.2.2 EMT與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移14-15
• 1.2.3 參與EMT的信號通路15-16
• 1.2.4 EMT與腫瘤干細(xì)胞16
• 1.3 HMGB1的研究進(jìn)展16-17
• 1.4 RNAi技術(shù)及其在腫瘤研究中的應(yīng)用17-18
• 1.5 研究目的及可行性18-19
• 第二章 材料與方法19-37
• 2.1 實驗材料19-22
• 2.1.1 研究對象19
• 2.1.2 實驗儀器及材料19
• 2.1.3 主要實驗試劑19-21
• 2.1.4 主要試劑的配制21-22
• 2.2 實驗方法22-37
• 2.2.1 HMGB1表達(dá)與下咽癌細(xì)胞EMT相關(guān)性的研究22-28
• 2.2.2 RNAi沉默HMGB1基因?qū)ο卵拾〦MT的影響28-33
• 2.2.3 RNAi沉默HMGB1基因?qū)a Du細(xì)胞侵襲遷移行為的影響33-36
• 2.2.4 RNAi沉默HMGB1基因?qū)AGE表達(dá)的影響36-37
• 第三章 實驗結(jié)果及分析37-49
• 3.1 HMGB1與下咽癌細(xì)胞EMT相關(guān)性的研究37-40
• 3.1.1 下咽癌EMT模型建立37-38
• 3.1.2 檢測HMGB1在下咽癌Fa Du細(xì)胞中的表達(dá)38-40
• 3.2 RNAi沉默HMGB1基因?qū)ο卵拾〦MT的影響40-44
• 3.2.1 Fa Du細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染效率40-41
• 3.2.2 si RNA對Fa Du細(xì)胞中的HMGB1基因表達(dá)的影響41-42
• 3.2.3 Fa Du細(xì)胞中的HMGB1基因?qū)ο卵拾〦MT的影響42-44
• 3.3 RNAi沉默HMGB1基因?qū)aDu細(xì)胞侵襲遷移行為的影響44-47
• 3.3.1 創(chuàng)傷愈合實驗檢測轉(zhuǎn)染后FaDu細(xì)胞侵襲能力的改變44-46
• 3.3.2 Transwell檢測轉(zhuǎn)染后Fa Du細(xì)胞侵襲能力的改變46-47
• 3.4 RNAi沉默HMGB1基因?qū)AGE表達(dá)的影響47-49
• 第四章 討論49-53
• 4.1 HMGB1表達(dá)與下咽癌細(xì)胞EMT相關(guān)性的研究49-50
• 4.2 RNAi沉默HMGB1基因?qū)ο卵拾〦MT的影響50
• 4.3 RNAi沉默HMGB1基因?qū)aDu細(xì)胞侵襲遷移行為的影響50-51
• 4.4 RNAi沉默HMGB1基因?qū)AGE表達(dá)的影響51-53
• 第五章 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 作者簡介及科研成果60-61
• 致謝61

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4 張旭芳;蔣宏偉;凌均h，

本文編號：369571