目的:通過調(diào)控?zé)嵝菘说鞍?7（heat shock protein 47,HSP47）的基因表達(dá),探索HSP47對(duì)鞏膜成纖維細(xì)胞（scleral fibroblasts,SF）的膠原合成、分泌和降解的影響。方法:正常的4周齡豚鼠,取后極部鞏膜組織培養(yǎng)SF并傳至3-5代進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分為4組:正常細(xì)胞作為正常對(duì)照組;空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為陰性對(duì)照（negative control,NC）組;分子克隆構(gòu)建攜帶HSP47基因的真核載體轉(zhuǎn)染到鞏膜成纖維細(xì)胞中作為HSP47上調(diào)組;化學(xué)法合成HSP47siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞并篩選出最佳抑制效果的序列及濃度作為HSP47下調(diào)組。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和蛋白免疫印跡（western blot,WB）檢測(cè)各組細(xì)胞的HSP47、I型膠原、III型膠原、V型膠原及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）的信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）和蛋白表達(dá)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1分子克隆HSP47A.基因裝置載體結(jié)果B.酶切鑒定：LaneM:DNAMarker，Lane1:PlasmiddigestedbyHindIIIandNheI，Lane

圖 2 RNA 電泳 Lane 1、2、3 分別為 NC 25 nM、50 nM、100 nM，Lane4、5、6 分別為第 1 條 HSP47siRNA（5’-ACAGGCCTCTACAACTACT -3’）25 nM、50 nM、100 nM，Lane7、8、9 分別為第 2 條 HSP47siRNA（5’-GACAAAGGAGCAGCTGAAA-3’）25 nM、 50 nM、100 nM，Lane10、11、12 分別為第 3 條 HSP47siRNA（5’-AGCTGTTCTATGCTGACCA-3’） 25nM、 50 nM、100 nM。T-PCR 檢測(cè) HSP47、I 型、III 型、V 型膠原和α-SMA 的 mRP47 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量（見表 1），與正常對(duì)照組相比，陰性對(duì)照=0.913），HSP47 上調(diào)組增多 2213.7%（P=0.013），HSP47 下調(diào)組減少3）；與陰性對(duì)照組相比，HSP47 上調(diào)組增多 2022.0%（P=0.012），明顯變化（P=0.088）。 型膠原 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量（見表 1），與正常對(duì)照組相比，陰性對(duì)

醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 郭慶P47 下調(diào)組無(wú)明顯變化（P=0.646，0.669），HSP47 上調(diào)組增多 81.0%（P=0,0陰性對(duì)照組相比，HSP47 上調(diào)組和下調(diào)組均無(wú)明顯變化（P=0.229，P=0.165）表 1 qRT-PCR 檢測(cè) mRNA 的相對(duì)表達(dá)量（ ±s）分組 HSP47 I 型膠原 III 型膠原 V 型膠原 α正常對(duì)照 1.00±0.06 1.00±0.15 1.00±0.07 1.00±0.13 1.0陰性對(duì)照 1.08±0.25 1.05±0.17 1.01±0.18 1.03±0.17 1.3SP47 上調(diào) 23.02±2.74▲◆1.59±0.18▲◆1.35±0.17 1.15±0.15 1.8SP47 下調(diào) 0.36±0.02▲0.62±0.19 0.65±0.05▲◆0.43±0.09▲◆0.7▲與正常對(duì)照組比較 P＜0.05，◆與陰性對(duì)照組比較 P＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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