目的探討P-糖蛋白對H₂O₂誘導的視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）細胞氧化損傷的抑制作用。方法取人RPE細胞株D407細胞,放入體積分數(shù)5%CO₂培養(yǎng)箱中用含體積分數(shù)10%胎牛血清和雙抗的DMEM培養(yǎng)基于37℃?zhèn)鞔囵B(yǎng)。先將細胞按H₂O₂濃度梯度處理,使用免疫印跡實驗和P-糖蛋白熒光性底物羅丹明123蓄積實驗確定H₂O₂對P-糖蛋白表達的最佳誘導濃度。預先使用1μmol·L^-1P-糖蛋白抑制劑Tariquidar處理細胞,通過測量細胞內(nèi)羅丹明123蓄積量檢測P-糖蛋白功能活性。將細胞分成3組:對照組、H₂O₂模型組(400μmol·L^-1)、H₂O₂+P-糖蛋白抑制劑組（H₂O₂+Tariquidar）,通過檢測細胞... 

【文章來源】：眼科新進展. 2020,40(10)北大核心

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【部分圖文】：

免疫印跡實驗檢測不同濃度H2O2處理后RPE細胞P-糖蛋白表達情況

檢測細胞內(nèi)羅丹明123熒光強度可以了解P-糖蛋白的功能活性。結(jié)果顯示,與0 μmol·L-1 H2O2相比,200 μmol·L-1、400 μmol·L-1和800 μmol·L-1H2O2處理細胞后細胞內(nèi)熒光強度均下降,并在400 μmol·L-1濃度時出現(xiàn)最低值,差異均有統(tǒng)計學意義(均為P<0.01)(見圖2)。這提示200 μmol·L-1、400 μmol·L-1和800 μmol·L-1H2O2能有效增加P-糖蛋白的轉(zhuǎn)運活性。H2O2在濃度400 μmol·L-1時對P-糖蛋白表達和功能均有最明顯的誘導作用,該濃度為最佳處理濃度,后續(xù)實驗均以400 μmol·L-1 H2O2作為模型誘導濃度。2.3 P-糖蛋白對RPE細胞內(nèi)ATP水平的影響

細胞內(nèi)ATP水平檢測結(jié)果見圖4,H2O2模型組ATP水平較對照組顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);而H2O2 + P-糖蛋白抑制劑組ATP水平則較H2O2模型組更低,差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示抑制P-糖蛋白功能可進一步加劇氧化應激所導致的ATP水平下降。圖4 熒光素/熒光素酶ATP檢測實驗檢測各組D407細胞內(nèi)ATP水平


本文編號：3484084