目的探討LXR-SIRT1調(diào)控軸在淀粉樣β（amyloidβ, Aβ）誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜上皮（retinal pigment epithelial, RPE）細(xì)胞炎癥和凋亡中的作用。方法體外培養(yǎng)ARPE-19細(xì)胞系,收集濕性年齡相關(guān)性黃斑變性（age-related macular degeneration,AMD）患者和正常受試者的人外周血單個(gè)核細(xì)胞（human peripheral blood mononuclear cell, PBMC）并檢測(cè)其中沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silencing information regulator 1, SIRT1）的mRNA表達(dá)。用1.0、5.0μmol/L的Aβ1-40和5.0μmol/L Aβ40-1處理ARPE-19細(xì)胞24 h,Real-time PCR檢測(cè)SIRT1、IL-1β、p21在ARPE-19細(xì)胞中的表達(dá),探討Aβ對(duì)ARPE-19細(xì)胞炎癥、凋亡的影響。用5.0μmol/L Aβ1-40和5.0μmol/L TO90處理ARPE-19細(xì)胞,Western blot檢測(cè)SIRT1、LXRα、ace-NF-κB、NF-κB、ace-p53、... 

【文章來(lái)源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,42(14)北大核心CSCD

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免疫熒光和Western blot檢測(cè)ARPE-19細(xì)胞中RPE65和ZO-1的表達(dá)

圖1 免疫熒光和Western blot檢測(cè)ARPE-19細(xì)胞中RPE65和ZO-1的表達(dá)2.3 Aβ1-40對(duì)SIRT1、p21和IL-1β mRNA表達(dá)的影響

CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示:相對(duì)于未處理組,陰性對(duì)照(NC)組細(xì)胞增殖活力降低。此外,與NC組比較,iSIRT1組細(xì)胞增殖活力進(jìn)一步降低(P<0.01,圖6A)。Real-time PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:與未處理組和NC組相比,iSIRT1組SIRT1的表達(dá)降低(P<0.01,圖6B～D)。表明病毒轉(zhuǎn)染本身不影響SIRT1的表達(dá),iSIRT1成功降低了SIRT1的表達(dá)。圖4 RT-PCR和Western blot檢測(cè)TO90預(yù)處理及Aβ1-40刺激對(duì)ARPE-19細(xì)胞SIRT1和LXRα表達(dá)的影響


本文編號(hào)：3291376