目的探討脫細(xì)胞結(jié)膜的制備方法,并觀察其移植修復(fù)兔結(jié)膜缺損的可行性。方法1.脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)的制備取新鮮豬球結(jié)膜（宰后3小時(shí),其僅含少許結(jié)膜下組織）先用0.2%戊二醛處理5min,再用0.25%胰酶/0.02%EDTA、1%TritonX-100、或兩者聯(lián)合進(jìn)行脫細(xì)胞處理,根據(jù)DAPI染色結(jié)果篩選出合適的結(jié)膜脫細(xì)胞方法,脫細(xì)胞處理后,將結(jié)膜置于超凈臺(tái)內(nèi)通風(fēng)干燥、紫外消毒8h備用。2.脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)的相關(guān)檢測使用可見分光光度計(jì)檢測檢測脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)的透光性,細(xì)菌、真菌培養(yǎng)行微生物檢測,免疫組織化學(xué)法檢測其抗原性,MTT法檢測細(xì)胞毒性。3.異種脫細(xì)胞結(jié)膜作為移植材料,修復(fù)兔結(jié)膜缺損的應(yīng)用（1）兔結(jié)膜缺損動(dòng)物模型的建立游離去除實(shí)驗(yàn)兔鼻上方約20mm×8mm球結(jié)膜、筋膜,并剪除對應(yīng)部分瞼結(jié)膜。（2）移植材料的動(dòng)物模型隨機(jī)將20只新西蘭大白兔分成4組,每組5只。A組移植制備的脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì);B組移植羊膜;C組移植未脫細(xì)胞異種結(jié)膜;D組不給予治療。術(shù)后3天,1周,2周,行結(jié)膜熒光素鈉染色大體觀察對照組及實(shí)驗(yàn)組結(jié)膜愈合、結(jié)膜囊狹窄、結(jié)膜粘連和血管化情況;術(shù)后1周,2周,6周取材處死實(shí)驗(yàn)組兔分別行HE染色... 

【文章來源】：濟(jì)南大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)的大體像

濟(jì)南大學(xué)碩士學(xué)位論文表 1 脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)與去上皮羊膜的吸光度及透光度波長（nm）脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì) 去上皮羊膜吸光度 透光度 吸光度 透光度4005006007000.354 0.646 0.583 0.4170.346 0.654 0.532 0.4680.283 0.717 0.461 0.5390.178 0.822 0.357 0.643800 0.013 0.987 0.192 0.808

圖 4 脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)的抗原性檢測結(jié)果（200 倍） A 未脫細(xì)胞的 PCK 抗原表達(dá) B 未脫細(xì)胞結(jié)膜的陰性對照 C 脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)無 PCK 抗原表達(dá) D的陰性對照脫細(xì)胞豬結(jié)膜基質(zhì)中無 PCK 抗原的表達(dá)（圖 4C），而未脫細(xì)胞的豬結(jié)顆粒的 PCK 抗原的表達(dá)（圖 4A）。2.4 脫細(xì)胞結(jié)膜基質(zhì)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)（MTT 法）測量各組培養(yǎng) 1 天、3 天、5 天、7 天之后的吸光度（A）值，并根據(jù)結(jié)過統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組 P 值為 0.729，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即組無差異。繪制細(xì)胞增殖曲線（圖 5）。以上結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對照組的細(xì)好，二者無明顯差異。證明脫細(xì)胞豬結(jié)膜基質(zhì)無細(xì)胞毒性，具有良好的細(xì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組及空白對照組的 A 值計(jì)算出細(xì)胞 RGR，對照性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)表格，得出脫細(xì)胞豬結(jié)膜基質(zhì)毒性為 1 級(jí)，合格，見表 2。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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