目的:探索miR-9-5p靶向BRAF調(diào)控脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞功能的機(jī)制。方法:1、miR-9-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞功能的影響體外培養(yǎng)人眼侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞MUM-2B和MUM-2C,通過陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法,瞬時轉(zhuǎn)染miR-9-5p的模擬序列（mimics）、抑制序列（inhibitor）及各自的對照序列（NC和inhibitor NC）,利用RT-qPCR檢測miR-9-5p表達(dá)變化;采用EDU實驗觀察細(xì)胞的增殖變化;采用Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移侵襲數(shù)量變化。2、miR-9-5p靶向結(jié)合BRAF并抑制BRAF的表達(dá)利用生物信息學(xué)網(wǎng)站TargetscanHuman7.2和microRNA.org分析預(yù)測miR-9-5p與BRAF mRNA 3’UTR區(qū)域的結(jié)合序列;采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-9-5p與BRAF mRNA 3’UTR區(qū)域的結(jié)合情況;利用RT-qPCR檢測BRAF mRNA的表達(dá)變化;利用Western Blotting檢測BRAF蛋白表達(dá)情況。3、BRAF對野生型脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞功能的影響利用基因干擾技術(shù),對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞MUM-2... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1RT-qPCR檢測轉(zhuǎn)染效率

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文13圖3.1.2.1EDU實驗檢測過表達(dá)miR-9-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響A.與NC組比較，miR-9-5pmimics組MUM-2B和MUM-2C細(xì)胞的增殖能力顯著下降（400×）；B.不同分組細(xì)胞的增殖變化均具有統(tǒng)計學(xué)意義。***P<0.001,*P<0.05。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14圖3.1.2.2EDU實驗檢測過表達(dá)miR-9-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響A.與inhibitorNC組比較，miR-9-5pinhibitor組MUM-2B和MUM-2C細(xì)胞的增殖能力顯著提高（400×）；B.不同分組細(xì)胞的增殖變化均具有統(tǒng)計學(xué)意義。**P<0.01,*P<0.05。3.1.3Transwell檢測miR-9-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞遷移及侵襲的影響本研究為繼續(xù)探索miR-9-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤遷移和侵襲的影響，進(jìn)行了Transwell實驗，結(jié)果如圖3.1.3所示：miR-9-5pmimics組脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞較NC組細(xì)胞遷移侵襲數(shù)量明顯減少，而miR-9-5pinhibitor組脈絡(luò)膜黑素瘤細(xì)胞較inhibitorNC組細(xì)胞遷移侵襲數(shù)量顯著增加，****P<0.0001,***P<0.001,**P<0.01，*P<0.05。綜上表明miR-9-5p負(fù)向調(diào)控脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。


本文編號：3090865