目的明確端粒酶抑制因子PINX1在鼻咽癌中的表達(dá)水平,從突變、DNA甲基化以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控多方面探討PINX1表達(dá)異常的分子機(jī)制,并應(yīng)用細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證新的信號通路。方法應(yīng)用熒光定量PCR法、免疫組織化學(xué)染色法檢測及評估PINX1在鼻咽癌組織和正常鼻咽部組織中的表達(dá)差異;應(yīng)用熒光定量PCR法、Western Blot法檢測PINX1在鼻咽癌細(xì)胞系和永生化鼻咽部上皮細(xì)胞系（NP69）、腎上皮細(xì)胞系（293T）中的表達(dá)差異;應(yīng)用PCR法測序分析鼻咽癌細(xì)胞系中PINX1基因的缺失、插入、突變情況;應(yīng)用亞硫酸鹽測序法（BSP）、甲基化敏感的高分辨率熔解曲線法（MS-HRM）檢測鼻咽癌細(xì)胞系及NP69的PINX1的甲基化程度;應(yīng)用去甲基化藥物5-氮雜-2’-脫氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine,5-aza-2’-dC）處理鼻咽癌細(xì)胞系后,熒光定量PCR法檢測藥物處理前后PINX1 mRNA的表達(dá)水平;在鼻咽癌細(xì)胞5-8F中過表達(dá)EBV潛伏膜蛋白LMP1,應(yīng)用Western Blot法檢測核因子NF-κB及PINX1的蛋白表達(dá)變化;應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測PINX1啟動子區(qū)潛在的NF-... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１？丨、＼１在鼻咽癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)

在非癌組織中ＰＩＮＸ１?ｍＲＮＡ的平均表達(dá)水平為１．４４±０．８２。相反，在８２．６１?％??（３８／４６）的鼻咽癌組織中可觀察到ＰＩＮＸ１蛋白的低表達(dá)，在鼻咽癌組織中ＰＩＮＸ１??ｍＲＮＡ的平均表達(dá)為０．７３±０．５３?（圖１－１Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ）?（ｐ＜０．００１）。以上數(shù)據(jù)表明，??與鼻咽部上皮組織相比，在鼻咽癌組織中，ＰＩＮＸ１的表達(dá)顯著減少。??２．ＰＩＮＸ１蛋白和ｍＲＮＡ在鼻咽癌細(xì)胞系和ＮＰ６９、２９３Ｔ中的表達(dá)??我們進(jìn)一步應(yīng)用熒光定量ＰＣＲ法和Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ法分別檢測了ＰＩＮＸ１在ＥＢＶ－??和ＥＢＶ＋的鼻咽癌細(xì)胞系和ＮＰ６９、２９３Ｔ中的表達(dá)水平。我們發(fā)現(xiàn)：在鼻咽癌細(xì)胞??系中ＰＩＮＸ１?ｍＲＮＡ的平均表達(dá)水平比ＮＰ６９降低了７６．９％?（圖１－１Ｅ）。在鼻咽癌細(xì)??胞系中ＰＩＮＸ１蛋白與ＮＰ６９、２９３Ｔ相比普遍表達(dá)減少（圖１－１Ｆ，Ｇ）。以上數(shù)據(jù)表??明，與ＮＰ６９，２９３Ｔ相比，在鼻咽癌細(xì)胞中，ＰＩＮＸ１的表達(dá)顯著減少。??Ａ?ＮＰＣ?ＮＰ?Ｄ?Ｚ?５＂）?Ｅ?■?１．Ｓ－Ｊ??奪變鑛轉(zhuǎn)纖�。常�?Ｂ：?ｉ?，?＾?，??ｋ。心，．１?ｉ。１嚴(yán)－嘐－??．．：：１二二：－－氣??二?＿＿?ＬａｍｉｎＢ１?｜，?＾????Ｂ?１５１?Ｃ?—?ＮＰＣ?Ｇ?Ｈ｜２〇??５?－ｒ?－ｐ?１〇〇ｌ?１＝１?ＮＰ?＾?＾?Ｓ??ｉｉ〇－?［５?ｓ〇－ｉ?ｎ?１ｉ－５－?＾??１?＿＿?Ｔ?ｆ?ｓ〇－?■???二Ｊ?！??！?５－?■?３?４０－?｜?ＬＭＰ１?—＞?—－?Ｉ?１０＇??１ＪＴ?丄?２：ｉｌ

但是，丨ｔｌ子Ｕ丨要大４的克隆測序，過程繁瑣。??根據(jù)軟件Ｍｅｔｈｙｌ?Ｐｒｉｍｅｒ?１．０杏找ＰＩＮＸ１啟動子Ｋ的ＣｐＧ島，設(shè)計(jì)ＢＳＰ引物，產(chǎn)??物長為４９２ｂｐ，共包含４３個(gè)ＣｐＧ位點(diǎn)（圖２－１）。??ＢＳＰ法檢測結(jié)果顯示：鼻咽癌細(xì)胞系與ＮＰ６９在ＰＩＮＸ１啟動子區(qū)的甲基化率極??低（圖２－２Ｂ），分別為ＣＮＥ－１：?０％；?ＣＮＥ－２：?０．５％；?ＨＯＮＥ１：?０．５％；?５－８Ｆ：?０．５％；??６－１０Ｂ：?１．９％；?ＮＰ６９：?２．３％。各細(xì)胞系甲基化率均低于５％，且鼻咽癌細(xì)胞系與??ＮＰ６９中的ＰＩＮＸ１甲基化率未見顯著差異。說明鼻咽癌細(xì)胞中ＰＩＮＸ１啟動子區(qū)基本??沒有發(fā)生甲基化。??３?２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]人類鼻咽癌端粒酶活性的研究及其臨床意義[J]. 彭宏,王希軍,楊光彩,江肅萍,趙彤.  中華耳鼻咽喉科雜志. 2000(04)



本文編號：2957233