發(fā)布時間：2020-12-28 02:34

　　青光眼是以特征性視神經(jīng)萎縮、視野缺損及視力下降為共同特征的眼科疾病。持續(xù)性眼壓升高是明確的青光眼發(fā)病的危險因素之一,因此,控制眼壓是青光眼治療的主要手段。穩(wěn)定的眼內壓主要取決于房水產生與外排速率間的平衡。由內部色素上皮層和外部非色素上皮層組成的睫狀體上皮負責房水的產生,小梁網(wǎng)-Schlemm管通路和葡萄膜鞏膜通路主要負責房水的外排。但是,由于房水產生和外排調節(jié)的復雜性,目前沒有有效的方法來治療升高的眼壓。先前的研究表明,TRPV4和TREK-1通道,作為一種重要的機械感壓力受器,在小梁網(wǎng)細胞和非色素上皮細胞表達并且在調控房水產生和外排中發(fā)揮重要的作用。這提示我們機械敏感性離子通道發(fā)揮重要的調節(jié)眼壓的生理和病理學作用。作為一種新型的機械敏感通道,盡管Piezo通道近年來已被報道在不同組織器官的機械轉導和功能維持方面發(fā)揮著至關重要的作用。但是Piezo是否在房水產生和外排通路上有明確的表達,以及在調控眼壓和房水循環(huán)方面發(fā)揮怎樣的功能目前仍然不清楚。目的:本研究旨在探究機械敏感離子通道Piezo1和Piezo2在房水循環(huán)通路的表達,以及Piezo通道對于眼壓和房水循環(huán)的影響。方法:利用免疫熒... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

人源小梁網(wǎng)組織Piezo免疫熒光染色的定量分析

結果12細胞中觀察到的Piezo1通道熒光強度要比PE細胞強。在3個供體的組織樣品中都證實了Piezo1通道的這種表達模式（圖1.3A）。同樣的，Piezo2在NPE和PE細胞中均表達，且主要在NPE細胞中表達（圖1.3B）。此外，在負責房水葡萄膜鞏膜流出通路的睫狀肌中我們也觀察到了Piezo2通道的明顯表達（圖1.4）。這些數(shù)據(jù)表明，Piezo1和Piezo2在睫狀體，尤其是負責房水產生的NPE中高表達，Piezo2在睫狀肌中明顯表達。表明了Piezo在響應外界機械變化進而調節(jié)房水產生和葡萄膜鞏膜流出通路中可能會發(fā)揮重要的作用。圖1.3Piezo在人源睫狀體非色素上皮細胞中表達睫狀體的非色素上皮（NPE）和色素上皮（PE）細胞顯示在明場（BF）圖像中（左圖）。在NPE細胞和PE細胞（尤其是NPE細胞）中均有Piezo1（紅色，A右圖）和Piezo2（紅色，B右圖）表達。右圖的左下角以較高倍數(shù)顯示了NPE細胞的染色結果。細胞核用DAPI染成藍色。比例尺：100μm。PC：后房，NPE：非色素上皮細胞，PE：色素上皮細胞。

青島大學碩士學位論文13圖1.4Piezo2在人源睫狀肌中明顯表達左圖，睫狀肌顯示在明場（BF）圖像中；右圖，Piezo2在睫狀肌中明顯表達。右圖左下角以較高倍數(shù)顯示了睫狀肌的染色結果。細胞核用DAPI染成藍色。比例尺：100μm。PC：后房，CM：睫狀跡3.Piezo在小鼠的虹膜角膜角有明顯表達我們進一步研究了Piezo通道在小鼠眼睛前節(jié)，特別是虹膜角膜角的表達。在我們的研究中通過帶有ColIV抗體的IHC來區(qū)分小鼠的前房角組織（圖1.5A）。用Piezo1和Piezo2抗體進行的IHC研究是在C57BL/6J背景的小鼠中進行的。如圖1.5B左圖所示，我們可以在整個TM組織、Schlemm管內皮細胞、角膜上皮和內皮細胞、睫狀體的上皮細胞中觀察到Piezo1和Piezo2的陽性染色（圖1.5B左圖）。我們通過高放大倍數(shù)圖像進一步確定了小梁網(wǎng)和Schlemm管的染色結果（圖1.5B右圖）。另外，我們通過Westernblot進一步確定了小鼠虹膜角膜角中Piezo1和Piezo2的明顯表達（圖1.6A）。如圖1.6B所示，基于Westernblot條帶的定量結果顯示，Piezo1和Piezo2與β-actin的相對表達分別為2.19±1.30（n=3）和0.726±0.089（n=3）。這些結果表明，Piezo通道可以在小鼠虹膜角膜角中明顯表達，暗示了它們在調節(jié)小鼠房水循環(huán)中的潛在作用。


本文編號：2942971