發(fā)布時間：2020-12-21 01:55

　　背景白內障是導致失明的主要原因。UV照射、代謝異常、基因突變、老化等因素能導致眼睛中的晶狀體代謝紊亂,晶狀體混濁,這些是白內障的主要發(fā)病原因。哺乳動物眼睛中的晶狀體是透明的結構,由兩種細胞組成,上皮細胞和纖維細胞。上皮細胞主要排列在晶狀體前半球,由單層細胞組成,具有終身增殖與分化的能力。其余部分是由終末分化的纖維細胞組成,主要維持晶狀體的內部穩(wěn)定及透明度。在哺乳動物的晶狀體中,上皮細胞會經過細胞周期停滯、伸長并分化成晶狀體纖維細胞。晶狀體上皮對維持晶狀體纖維的穩(wěn)態(tài)起著至關重要的作用,影響晶狀體的生長,分化與穩(wěn)態(tài)。老年性白內障是白內障中最常見的類型,主要表現(xiàn)為晶狀體渾濁,晶狀體上皮細胞的衰老會使細胞增殖受抑制,細胞周期阻滯,導致白內障的發(fā)生。熱休克因子（HSF）是介導熱休克反應的主要轉錄因子,主要是轉錄調控熱休克蛋白（Hsps）的表達。熱休克蛋白作為分子伴侶保護細胞免受蛋白毒性等損傷。在熱休克或在某些壓力條件下,熱休克因子結合熱休克蛋白（HSPs）基因啟動子上的熱休克元件（HSE）,激活熱休克蛋白基因的轉錄。哺乳動物中熱休克因子至少由三個成員組成,Hsf1、Hsf2和Hsf4。Hsf4屬... 

【文章來源】：河南大學河南省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

敲除Hsf4的斑馬魚眼睛內出現(xiàn)明顯的白內障

圖 2.2 敲除 Hsf4 斑馬魚的晶狀體具有衰老相關表型。（A）用解剖鑷將 12 個月的的斑馬魚的晶狀體從眼睛中剝離，用 500 μl 的 β-Gal 染色固定液固定 15 min，按孵育 1-2 h，在體式顯微鏡下觀察晶狀體著色情況。（B）將 12 個月的 Hsf4 mutant 用 100 μl 的 β-Gal 染色固定液固定 15 min，按說明書配制染色液孵育 1-2 h，在體狀體上皮細胞著色情況。（C）取 WT、Hsf4 mutant 的成年斑馬魚的晶狀體， Triz組織中的 RNA，通過 qRT-PCR 檢測衰老相關的分泌因子 zIL1b、zIL15、zIF、zIL7az-CXCL12 的表達量。zβ-actin 為內參。2.3 在小鼠晶狀體上皮細胞中敲除 Hsf4，導致不依賴表達量上升在小鼠晶狀體上皮細胞中，利用 CRISPR/Cas9 技術在 Hsf4 基因的GFP 標簽，敲除 Hsf4 基因。最終篩選出 3 株敲除 Hsf4 的細胞株，在前敲除細胞系中出現(xiàn)衰老的表型，如 β-半乳糖甘酶活性增高、衰老相關異染

許多刺激反應的重要介質[22]，當細胞受到外界刺激后，抑癌基因 p531 是 p53 的下游靶基因，p21 對 G1 期 CDK 起抑制作用，使細胞周期阻以我們猜想是否在敲除 Hsf4 小鼠晶狀體上皮細胞中，引起 p21 表達p53-p21-RB 這條通路。首先我們鋪兩組野生型 mLEC 和敲除 Hsf4 的組細胞直接用正常培養(yǎng)基培養(yǎng) 24 h，另一組用正常培養(yǎng)基培養(yǎng) 12 h再恢復 12 h，收取細胞，用 NP40 裂解 30min，取上清液。免疫印跡p53、p-p53、GFP 的表達量，結果發(fā)現(xiàn)在 ctrl 的一組細胞中，與野生除 Hsf4 細胞系中 p21 的表達量上升（圖 2.3 第 2.3.4 泳道），用 10JU上升更明顯（圖 2.3 第 6.7.8 泳道）。無論是否用 10JUV 處理，與野敲除 Hsf4 細胞系中 p-p53/S15、p53 的表達量幾乎不變（圖 2.3），在中 GFP 蛋白均表達出來（圖 2.3）。因此在晶狀體上皮細胞中敲除 H3 未發(fā)生磷酸化，p21 的誘導不依賴于 p53 這條通路。


本文編號：2928965