目的探討木犀草素對(duì)碘酸鈉誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及視網(wǎng)膜損傷的保護(hù)作用。方法體外實(shí)驗(yàn)選擇ARPE-19細(xì)胞,先將細(xì)胞分為對(duì)照組、單純木犀草素濃度梯度組及對(duì)照組、碘酸鈉模型組、木犀草素濃度梯度治療組,MTT分別檢測(cè)各組細(xì)胞活力。隨后將細(xì)胞分為對(duì)照組,碘酸鈉模型組,木犀草素治療組(50μmol·L~(-1)),Hoechst33342染色和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡,Western blotting檢測(cè)Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3及HMGB1、TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量的變化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將30只C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、碘酸鈉模型組和木犀草素治療組,木犀草素治療組給予木犀草素預(yù)處理1周后,模型組與治療組鼠尾靜脈給予碘酸鈉造模,木犀草素治療組繼續(xù)如前給藥4周,OCT測(cè)量測(cè)視網(wǎng)膜厚度,HE染色觀察形態(tài)學(xué)變化并統(tǒng)計(jì)玻璃膜疣數(shù)量,ERG檢測(cè)a波、b波振幅及其潛伏期。結(jié)果體外實(shí)驗(yàn):MTT顯示,與對(duì)照組相比,單純木犀草素濃度(10-100)μmol·L~(-1)吸光度值無(wú)明顯變化(P0.05),而單純木犀草素濃度為200μmol·L~(-1)時(shí)吸光度值低于對(duì)照組(P0.05);碘酸鈉模型組吸光度值低于對(duì)照組(P0.05),木犀草素濃度梯度治療組吸光度值均高于碘酸鈉模型組(P0.05)。Hoechst33342染色顯示,碘酸鈉模型組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組(P0.05),木犀草素治療組細(xì)胞凋亡率低于碘酸鈉模型組(P0.05)。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示,與對(duì)照組相比碘酸鈉模型組細(xì)胞凋亡率更高(P0.05),而木犀草素治療組細(xì)胞凋亡率較碘酸鈉模型組低(P0.05)。Western blotting檢測(cè)顯示,碘酸鈉模型組Bcl-2相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組(P0.05),木犀草素治療組Bcl-2相對(duì)表達(dá)量高于碘酸鈉模型組(P0.05),碘酸鈉模型組Bax,cleaved caspase-3以及HMGB1、TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組(P0.05),木犀草素治療組Bax,cleaved caspase-3以及HMGB1、TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量均低于碘酸鈉模型組(P0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):OCT顯示,對(duì)照組各層結(jié)構(gòu)排列均一整齊,與碘酸鈉模型組相比,木犀草素治療組RPE層高反射點(diǎn)減少,內(nèi)核層和外核層相對(duì)厚度增加(P0.05),全層視網(wǎng)膜相對(duì)厚度增加(P0.05)。HE染色顯示,與碘酸鈉模型組比,木犀草素治療組內(nèi)核層、外核層外核層細(xì)胞密度更高(P0.05),RPE層連續(xù)性增加,玻璃膜疣數(shù)量減少(P0.05),ERG顯示,碘酸鈉模型組a波、b波振幅及其潛伏期均低于對(duì)照組(P0.05),木犀草素治療組a波、b波振幅及其潛伏期均高于碘酸鈉模型組(P0.05)。結(jié)論木犀草素通過(guò)減輕HMGB1/TLR4/NF-κB介導(dǎo)的炎癥抑制碘酸鈉誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞凋亡并減少視網(wǎng)膜損傷。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R774.1
【部分圖文】：

結(jié)果一、 木犀草素對(duì)碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細(xì)胞活力影響MTT 測(cè)定結(jié)果顯示（圖 1A），木犀草素濃度為（10-100）μmol·L-1時(shí)與對(duì)照組相比吸光度值無(wú)明顯變化，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；木犀草素濃度為200μmol·L-1時(shí)與對(duì)照組相比吸光度值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明對(duì) ARPE-19 細(xì)胞而言，木犀草素安全濃度為（10-100）μmol·L-1。隨后為了評(píng)估安全濃度范圍內(nèi)木犀草素對(duì)碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細(xì)胞活力影響，我們發(fā)現(xiàn)（圖 1B），碘酸鈉模型組吸光度值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），木犀草素濃度梯度治療組各組吸光度值均高于碘酸鈉模型組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。木犀草素濃度在 50μmol·L-1時(shí)吸光度值最高，后續(xù)體外實(shí)驗(yàn)均以 50μmol·L-1作為木犀草素治療組濃度。

結(jié)果一、 木犀草素對(duì)碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細(xì)胞活力影響MTT 測(cè)定結(jié)果顯示（圖 1A），木犀草素濃度為（10-100）μmol·L-1時(shí)與對(duì)照組相比吸光度值無(wú)明顯變化，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；木犀草素濃度為200μmol·L-1時(shí)與對(duì)照組相比吸光度值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明對(duì) ARPE-19 細(xì)胞而言，木犀草素安全濃度為（10-100）μmol·L-1。隨后為了評(píng)估安全濃度范圍內(nèi)木犀草素對(duì)碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細(xì)胞活力影響，我們發(fā)現(xiàn)（圖 1B），碘酸鈉模型組吸光度值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），木犀草素濃度梯度治療組各組吸光度值均高于碘酸鈉模型組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。木犀草素濃度在 50μmol·L-1時(shí)吸光度值最高，后續(xù)體外實(shí)驗(yàn)均以 50μmol·L-1作為木犀草素治療組濃度。

圖 2 Hoechst 33342 染色和流式檢測(cè)結(jié)果注：圖 2A 和 B：a：對(duì)照組；b：碘酸鈉模型組；c：木犀草素治療組。圖 2C 和 D：分別為 Hoechst 33342 染色和流式檢測(cè)的 ARPE-19 細(xì)胞凋亡率統(tǒng)計(jì)圖，與對(duì)照組相比，*P＜0.05，與碘酸鈉模型組相比，**P＜0.05。三、 木犀草素對(duì)碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細(xì)胞中 Bcl-2、Bax、

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本文編號(hào)：2813199