【摘要】：目的:鼻咽癌是源自鼻咽上皮的惡性腫瘤,在東南亞及我國南方地區(qū)高發(fā),具有局部復發(fā)率高和早期遠處轉移等特點。核轉錄因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)是Rel蛋白家族成員,廣泛存在于多種組織和細胞中,調控多個基因的表達。NF-κB不僅涉及免疫反應、細胞生長、存活和發(fā)展等生理過程,而且NF-κB的異�；罨谧陨砻庖咝约膊�、炎癥及惡性腫瘤等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究擬構建NF-κBp65特異性siRNA質粒表達載體穩(wěn)定轉染的鼻咽癌5-8F細胞株,探明NF-κBp65沉默對5-8F細胞克隆形成能力及致瘤性的影響,檢測NF-κBp65沉默影響的干細胞相關分子,為靶向干細胞治療鼻咽癌提供實驗依據(jù)。方法:(1)NF-κBp65 siRNA質粒表達載體及陰性質粒載體分別轉染鼻咽癌5-8F細胞,經G418篩選并擴大培養(yǎng),獲得穩(wěn)定轉染的單克隆細胞株。采用Western blotting鑒定NF-κBp65蛋白的表達,篩選出用于后續(xù)實驗的NF-κBp65沉默的5-8F細胞株和陰性對照5-8F細胞株。實驗分組:空白對照組、陰性對照組和NF-κBp65沉默組。(2)采用平板克隆形成實驗和軟瓊脂集落形成實驗檢測鼻咽癌5-8F細胞的克隆形成能力。(3)采用裸鼠移植瘤實驗分析鼻咽癌5-8F細胞的成瘤性。(4)采用Western blotting檢測5-8F細胞中腫瘤干細胞相關基因的表達。結果:(1)Western blotting鑒定結果顯示:與空白對照組和陰性對照組比較,沉默組鼻咽癌5-8F細胞中的NF-κBp65蛋白表達明顯降低。(2)細胞平板克隆形成實驗和軟瓊脂集落形成實驗結果表明,與空白對照組和陰性對照組相比,NF-κBp65沉默細胞形成的克隆體積小、數(shù)量少。(3)各組鼻咽癌5-8F細胞分別接種于裸鼠右前肢皮下,常規(guī)飼養(yǎng)40 d后,NF-κBp65沉默組移植瘤重量(0.047±0.094)g明顯小于陰性對照組(1.793±0.628)g和空白對照組(1.335±0.528)g,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)Western blotting檢測結果顯示:NF-κBp65沉默組腫瘤干細胞相關基因β-catenin、CD44、Sox2和Oct4表達明顯低于空白對照組和陰性對照組。結論:(1)NF-κBp65 siRNA質粒表達載體轉染鼻咽癌5-8F細胞有效降低NF-κBp65蛋白的表達。(2)NF-κBp65沉默誘導的干細胞相關基因表達下調可能是鼻咽癌5-8F細胞克隆形成抑制和致瘤性降低的分子原因。
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.63

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本文編號：2738539