【摘要】：【背景】內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum,ER)應(yīng)激在慢性間歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中起著關(guān)鍵作用,但CIH如何引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,其中的機(jī)制尚不清楚。血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)-PLC-三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)信號(hào)通路已被證實(shí)可引起ER應(yīng)激。本研究的目的是為了探索AngⅡ-PLC-IP3信號(hào)通路是否參與CIH誘導(dǎo)的血管損傷,是否可以調(diào)控CIH誘導(dǎo)的ER應(yīng)激,以及選擇性血管緊張素Ⅱ型受體(angiotensinⅡtype 1receptor,AT1R)阻滯劑氯沙坦(losartan)是否能夠抑制CIH誘導(dǎo)的主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。【方法】將64只8周齡成年雄性SD大鼠隨機(jī)分配為八組(每組8只):常氧(room air,RA)組,RA+氯沙坦組,CIH組,CIH+氯沙坦組;RA+U73122(PLC的選擇性抑制劑)組,RA+氯沙坦+U73122組,CIH+U73122組,CIH+氯沙坦+U73122組。大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡水平用原位末端標(biāo)記法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP-biotin nick end labeling,TUNEL)的方法檢測,用免疫組化、實(shí)時(shí)定量PCR(quantitative real time PCR,RT-q PCR)、蛋白免疫印跡(western blotting,WB)檢測ER應(yīng)激標(biāo)記物的表達(dá)水平,用WB檢測PLC-γ1、三磷酸肌醇受體(inositol triphosphate receptor,IP3R)和AT1R的蛋白表達(dá)水平,大鼠血漿內(nèi)AngⅡ的表達(dá)水平用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-lined immunosorbent assay,ELISA)檢測�！窘Y(jié)果】CIH引起PLC-γ1和IP3R的表達(dá)水平增加,ER應(yīng)激水平降低,主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡增加。氯沙坦可保護(hù)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,減少PLC-γ1、IP3R和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的表達(dá)水平,氯沙坦和U73122聯(lián)合使用與單獨(dú)使用氯沙坦效果相似�！窘Y(jié)論】本研究表明,AngⅡ-PLC-IP3信號(hào)通路參與了CIH誘導(dǎo)的ER應(yīng)激,氯沙坦通過抑制AngⅡ-PLC-IP3信號(hào)通路改善CIH引起的主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡�！颈尘啊堪⑼蟹ニ”蛔C實(shí)可以改善慢性間歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)引起的心肌肥厚。然而,對(duì)于阿托伐他汀調(diào)控CIH誘導(dǎo)的心肌肥大的機(jī)制,以及心肌肥大特異性相關(guān)的micro RNAs是否參與調(diào)控尚不清楚。Mi R-31在缺血/缺氧誘導(dǎo)的心肌肥大的過程中起著關(guān)鍵作用。本研究主要是為了探索mi R-31是否參與了阿托伐他汀對(duì)CIH誘導(dǎo)的心肌肥大的保護(hù)作用。【方法】H9c2細(xì)胞每天在有或沒有阿托伐他汀干預(yù)的情況下進(jìn)行8小時(shí)CIH或常氧(room air,RA),持續(xù)5天。用免疫熒光技術(shù)檢測心肌細(xì)胞大小,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real time PCR,RT-q PCR)檢測心肌細(xì)胞內(nèi)mi R-31、ANP、BNP、MYH7的表達(dá),蛋白免疫印跡(western blotting,WB)檢測心肌細(xì)胞內(nèi)caspase 3表達(dá)情況。用mi R-31 mimics或特定的蛋白激酶Cε亞型(protein kinase C epsilon,PKCε)抑制劑Ro31-8220干預(yù),探索mi R-31在阿托伐他汀對(duì)抗心肌細(xì)胞肥大中的作用。在心肌細(xì)胞中,上調(diào)或下調(diào)mi R-31的表達(dá),用WB和RT-q PCR方法檢測PKCε的表達(dá)情況。【結(jié)果】結(jié)果表明,CIH誘導(dǎo)心肌細(xì)胞明顯增大,并伴有心房利鈉肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、腦利鈉肽(brain natriuretic peptide,BNP)和心肌肌球蛋白重鏈(slow/beta cardiac myosin heavy-chain,MYH7)m RNA水平升高,所有這些改變都被阿托伐他汀阻止。與此同時(shí),CIH能使mi R-31在心肌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)升高,阿托伐他汀預(yù)處理可減少mi R-31的表達(dá),顯著增加PKCε的m RNA和蛋白表達(dá)水平。而過表達(dá)mi R-31則抑制了阿托伐他汀對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。上調(diào)和下調(diào)mi R-31分別減少和增加PKCε的m RNA和蛋白表達(dá)�！窘Y(jié)論】這些結(jié)果表明,阿托伐他汀可能通過上調(diào)PKCε和下調(diào)mi R-31保護(hù)CIH導(dǎo)致的心肌細(xì)胞肥大�！颈尘啊恐靖伟l(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)與阻塞性睡眠呼吸暫停(obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)有關(guān)。許多研究表明,自噬對(duì)各種疾病引起的肝損傷具有保護(hù)作用,褪黑素也具有強(qiáng)大的肝臟保護(hù)功能。然而,慢性間歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)導(dǎo)致肝損傷的機(jī)制以及褪黑素對(duì)肝損傷的調(diào)控作用尚不清楚。本研究旨在研究CIH導(dǎo)致肝損傷的機(jī)制,褪黑素對(duì)CIH引起肝損傷的調(diào)控作用,以及自噬這一信號(hào)通路是否參與其中�！痉椒ā繉⒏咧撅嬍�(high-fat diet,FD)的全身肥胖小鼠暴露于CIH或者常氧,每天8 h,持續(xù)6周。同時(shí)使用自噬興奮劑雷帕霉素,或自噬抑制劑3-methyladenine(3-MA);sirtuin 1(SIRT1)激活劑SRT1720,或SIRT1抑制劑sirtinol;用或不用褪黑素干預(yù),然后檢測自噬相關(guān)基因的表達(dá)和小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的活性以及組織學(xué)評(píng)估肝臟的組織學(xué)形態(tài)�！窘Y(jié)果】單獨(dú)的FD或者CIH均不引起明顯的肝損傷;然而,這兩種刺激聯(lián)合導(dǎo)致小鼠更高的血清轉(zhuǎn)氨酶活性和更嚴(yán)重的肝臟組織學(xué)病變,伴隨著自噬活性的降低。褪黑素通過增強(qiáng)自噬顯著抑制FD/CIH引起的肝損傷。然而,抑制SIRT1導(dǎo)致自噬相關(guān)基因表達(dá)減少,并降低褪黑素對(duì)FD/CIH誘導(dǎo)的肝損傷的保護(hù)作用�！窘Y(jié)論】這些結(jié)果提示褪黑素通過激活SIRT1介導(dǎo)的自噬信號(hào)通路改善FD/CIH誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R766
【圖文】：

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文.6 數(shù)據(jù)分析所有的數(shù)據(jù)都用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。采用單因素方差分析(ANOVA)對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。采用 Newman-Keuls 檢驗(yàn)方法。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.結(jié)果.1 氯沙坦能顯著降低 CIH 誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡CIH 組大鼠與 RA 組相比，主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡明顯增加(P＜0.05)（圖 1)。氯或 U73122 治療可有效降低 CIH 誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。聯(lián)合使用氯沙 U73122 的效果與單獨(dú)使用氯沙坦或 U73122 的效果相似。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文 為被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)顯著性。*P＜0.05 vs RA+saline；**P＜0.01 vs CIH+salin氯沙坦降低了 CIH 誘導(dǎo)的 RAS 活化如圖 2 所示，CIH 可使大鼠血漿中 AngⅡ濃度顯著高于 RA 組(P＜0.05)（ RT-qPCR 方法檢測主動(dòng)脈弓內(nèi) AGT 的表達(dá)，CIH 組與 RA 組相比 AGTP＜0.05)（圖 2b)。與 RA 組相比，CIH 還能顯著提高主動(dòng)脈動(dòng)脈弓內(nèi) AT1水平(P＜0.05)（圖 2c、2d)。氯沙坦能減少 CIH 組 AngⅡ、AGT 和 AT1R；然而，U73122 卻不能改變 AngⅡ、AGT 和 AT1R 的表達(dá)，其中 AngⅡ濃度。

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本文編號(hào)：2736593