【摘要】：目的:探討新型C型凝集素受體DC-SIGN(CD209)在煙曲霉菌感染角膜上皮細胞中的表達及作用。方法:收集就診于青島大學附屬醫(yī)院的真菌性角膜炎患者行清創(chuàng)術中刮取的角膜上皮組織,應用RT-PCR技術檢測其中DC-SIGN基因的表達;同時應用免疫組化技術檢測DC-SIGN蛋白在人角膜上皮細胞中的表達及定位。煙曲霉菌菌絲處理體外培養(yǎng)的永生化角膜上皮細胞(HCECs)12、24、48h之后應用RT-PCR、RT-q PCR及western blot技術評價煙曲霉菌感染的角膜上皮細胞中DC-SIGN的表達水平。建立大鼠煙曲霉菌性角膜炎模型,感染后12,24,48h取各組角膜上皮行RT-PCR及RT-q PCR觀察DC-SIGN m RNA表達情況,并取角膜組織行免疫熒光技術檢測DC-SIGN蛋白水平在大鼠角膜上皮細胞中的表達。檢測大鼠真菌性角膜模型中DC-SIGN表達、炎癥程度評分及炎癥因子IL-6、IL-1βm RNA的表達并進行相關性分析。真菌刺激HCECs中加入JNK、ERK、p38通路抑制劑,檢測DC-SIGN m RNA及蛋白水平的表達。結果:DC-SIGN m RNA在正常人的角膜上皮細胞中表達量較少,但是在真菌性角膜炎患者中的表達量升高。免疫組化顯示DC-SIGN蛋白表達于角膜上皮細胞的胞漿,尤其在基底層上皮細胞中表達較多。在HCECs中,菌絲刺激后DC-SIGN m RNA及蛋白的表達水平較正常細胞均明顯升高。DC-SIGN在正常大鼠角膜上皮細胞中表達量較低,在大鼠煙曲霉菌性角膜炎模型的角膜上皮細胞中表達升高。免疫熒光結果顯示DC-SIGN蛋白表達于大鼠角膜組織。大鼠真菌性角膜炎模型中DC-SIGN表達量與炎癥反應程度(r=0.618,P=0.003)及IL-6(r=0.736,P=0.001)、IL1-β(r=0.714,P=0.001)表達變化相關。真菌刺激HCEC s中加入ERK通路抑制劑U0126后可見DC-SIGN m RNA及蛋白水平表達均明顯降低。結論:DC-SIGN在真菌性角膜炎患者、大鼠真菌性角膜炎模型角膜上皮細胞及真菌感染HCESs中均表達;DC-SIGN的表達與真菌性角膜炎的炎癥反應程度相關;ERK/MAPK通路介導了真菌感染角膜上皮細胞DC-SIGN的表達。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R772.21

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本文編號：2731647