本文關(guān)鍵詞：HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育和藥物性聾過(guò)程中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：感音神經(jīng)性聾是耳科的常見(jiàn)病,耳蝸毛細(xì)胞的損傷是引起感音神經(jīng)性聾的重要原因,如何防止毛細(xì)胞損傷、保護(hù)毛細(xì)胞是我們研究的重要課題。熱休克蛋白是在真核和原核生物中都廣泛表達(dá),進(jìn)化中高度保守的一類蛋白質(zhì),有一個(gè)共同的特性就是提高細(xì)胞的應(yīng)激能力,對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用。熱休克蛋白60(Heat Shock protein,HSP60)是分子量為60 k Da的熱休克蛋白家族,目前研究在神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用,本研究中我們檢測(cè)了HSP60在SD大鼠耳蝸發(fā)育過(guò)程中和藥物性耳聾模型中的表達(dá)變化,結(jié)果提示隨著耳蝸的發(fā)育中,HSP60表達(dá)量逐漸升高,大鼠藥物性耳聾模型中HSP60的表達(dá)量升高。通過(guò)耳蝸免疫熒光染色和免疫組織化學(xué)染色,我們定位HSP60在耳蝸中表達(dá)于Corti器的部分支持細(xì)胞中。推測(cè)HSP60在大鼠耳蝸的發(fā)育過(guò)程和藥物性耳聾發(fā)生過(guò)程中,可能介導(dǎo)支持細(xì)胞對(duì)毛細(xì)胞的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)一HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達(dá)目的檢測(cè)HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達(dá)變化,觀察HSP60在耳蝸發(fā)育中的表達(dá)分布。方法SD大鼠50只,雌雄不限,按出生后天數(shù)分為五組:P0、P3、P7、P14和P28。實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot分別檢測(cè)HSP60的m RNA和蛋白表達(dá)量的變化;免疫熒光組織化學(xué)染色,觀察HSP60在耳蝸的表達(dá)部位分布及表達(dá)變化。結(jié)果實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot的結(jié)果顯示HSP60在SD大鼠出生后即有表達(dá),呈增長(zhǎng)趨勢(shì),到P14時(shí),與前三組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),P28與P14相同而維持穩(wěn)定狀態(tài)(P0.05)。免疫熒光染色,觀察到HSP60于P0-P7沒(méi)有明顯陽(yáng)性表達(dá),P14和P28表達(dá)于Corti器的部分支持細(xì)胞。結(jié)論大鼠出生后HSP60在耳蝸中表達(dá)量呈增長(zhǎng)趨勢(shì),表達(dá)于Corti器的支持細(xì)胞中,可能在耳蝸發(fā)育過(guò)程中對(duì)毛細(xì)胞起到了保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)二HSP60在藥物性耳聾大鼠耳蝸中的表達(dá)變化目的檢測(cè)HSP60在大鼠耳蝸的表達(dá)分布及硫酸卡那霉素和呋塞米損傷下的表達(dá)變化。方法正常成年SD大鼠20只,雌雄不限,隨機(jī)分為兩組:對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(D7組),實(shí)驗(yàn)組給予呋塞米100mg/kg頸靜脈注射,而后立即硫酸卡那霉素500mg/kg后腿內(nèi)側(cè)肌肉注射;對(duì)照組相應(yīng)的注射等量的生理鹽水。ABR檢測(cè)聽(tīng)力變化;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)HSP60的m RNA表達(dá)量的變化;免疫熒光染色觀察HSP60在耳蝸中的表達(dá)變化及分布。結(jié)果ABR檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯升高(P0.05),且頻率越高,升高越明顯。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示D7組HSP60表達(dá)量升高(P0.05)。冰凍切片免疫熒光染色和免疫組織化學(xué)染色,觀察到HSP60表達(dá)于Corti器上的支持細(xì)胞內(nèi)。冰凍切片免疫組織化學(xué)染色和基底膜鋪片免疫熒光染色,觀察到D7組HSP60表達(dá)升高。結(jié)論HSP60表達(dá)于支持細(xì)胞,正常生理情況下即表達(dá),藥物中毒性耳聾模型中表達(dá)量升高,推測(cè)HSP60可能參與了藥物性耳聾的發(fā)生過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：熱休克蛋白60 支持細(xì)胞 聽(tīng)力損失
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)回顧14-22
• 實(shí)驗(yàn)一 HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達(dá)22-37
• 1 材料22-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 1.2 主要試劑22-23
• 1.3 主要儀器23-24
• 1.4 溶液配制24-25
• 2 方法25-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)安排25
• 2.2 耳蝸樣本取材25-26
• 2.3 實(shí)時(shí)定量PCR26-28
• 2.4 Western Blot28-31
• 2.5 免疫熒光染色31-32
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32
• 3 結(jié)果32-35
• 3.1 HSP60在耳蝸不同發(fā)育階段耳蝸中的表達(dá)變化32-33
• 3.2 HSP60在耳蝸不同發(fā)育階段耳蝸中的表達(dá)部位33-35
• 4 討論35-37
• 實(shí)驗(yàn)二 HSP60在藥物性耳聾大鼠耳蝸中的表達(dá)變化37-53
• 1 材料37-39
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物37
• 1.2 主要試劑37-38
• 1.3 主要儀器38-39
• 1.4 溶液配制39
• 2 方法39-45
• 2.1 實(shí)驗(yàn)安排39
• 2.2 ABR檢測(cè)39-40
• 2.3 耳蝸樣本取材40
• 2.4 實(shí)時(shí)定量PCR40-43
• 2.5 免疫熒光染色43-44
• 2.6 掃描電鏡觀察44
• 2.7 免疫組化染色44-45
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45
• 3 結(jié)果45-50
• 3.1 藥物誘導(dǎo)大鼠耳聾模型的建立45-47
• 3.2 HSP60在藥物性耳聾中的表達(dá)變化47-50
• 4 討論50-53
• 小結(jié)53-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 附錄61-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果62-63
• 致謝63

  本文關(guān)鍵詞：HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育和藥物性聾過(guò)程中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：262319