【摘要】：目的已知全反式維甲酸(ATRA)可以改善角膜上皮缺損。本文通過(guò)全反式維甲酸(ATRA)處理?yè)p傷后大鼠角膜上皮,探討ATRA對(duì)大鼠角膜上皮損傷修復(fù)過(guò)程中角膜上皮細(xì)胞凋亡以及緊密連接結(jié)構(gòu)重塑的影響,并進(jìn)一步對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法普通級(jí)健康2個(gè)月鼠齡雄性SD大鼠200-300g左右眼分組,左眼為溶劑對(duì)照組,右眼為ATRA處理組(加藥組)。適應(yīng)性飼養(yǎng)三天后,10%的水合氯醛麻醉大鼠,眼科手術(shù)刀片刮除角膜,建立體內(nèi)大鼠角膜上皮損傷修復(fù)模型,通過(guò)熒光染色并拍照記錄損傷后不同時(shí)間大鼠角膜損傷修復(fù)情況,觀察并計(jì)算ATRA對(duì)大鼠角膜損傷修復(fù)速度的影響;原位末端凋亡法(TUNEL技術(shù))觀察并測(cè)定不同處理下?lián)p傷修復(fù)過(guò)程中角膜組織細(xì)胞凋亡情況;免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IF)檢測(cè)角膜上皮組織中凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)與分布;組織通透性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同處理下?lián)p傷修復(fù)過(guò)程中角膜組織通透性變化;Western blot實(shí)驗(yàn)測(cè)定ATRA處理后角膜上皮組織中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase家族,絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路蛋白,緊密連接蛋白ZO-1、occludin以及遷移相關(guān)蛋白MLCK、p-MLC的表達(dá)情況。結(jié)果成功復(fù)制了角膜上皮損傷修復(fù)模型。0.5 mmol/L ATRA點(diǎn)滴處理組角膜損傷修復(fù)的速度明顯高于對(duì)照組,表明ATRA可以促進(jìn)角膜上皮損傷修復(fù);TUNEL結(jié)果顯示ATRA處理后角膜上皮細(xì)胞凋亡明顯少于CT組和空白組,IF結(jié)果顯示ATRA能降低大鼠角膜上皮組織中bax的表達(dá),表明ATRA可明顯較少角膜損傷修復(fù)過(guò)程中角膜上皮細(xì)胞凋亡;組織通透性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ATRA可明顯降低愈合過(guò)程角膜上皮通透性;Western blot結(jié)果顯示ATRA有效抑制促凋亡蛋白Bax表達(dá)(P0.05),上調(diào)凋亡抑制蛋白bcl-2表達(dá)(P0.05),表現(xiàn)出一定的抗凋亡作用,同時(shí)上調(diào)Procaspases-9、Procaspases-3表達(dá)(P0.05),下調(diào)Caspases-3、Caspases-9表達(dá)(P0.05);結(jié)果還顯示ATRA也可調(diào)節(jié)角膜上皮組織中MAPK信號(hào)通路蛋白p38、ERK、JNK的磷酸化水平,其中p38、ERK的磷酸化水平均下調(diào),JNK的磷酸化水平上調(diào)ATRA能促進(jìn)損傷修復(fù)一定階段上皮細(xì)胞間ZO-1、occludin蛋白表達(dá)水平,同時(shí)下調(diào)MLCK表達(dá)水平,抑制MLC的磷酸化。結(jié)論全反式維甲酸促進(jìn)大鼠角膜上皮損傷修復(fù),并可抑制角膜修復(fù)過(guò)程中上皮組織細(xì)胞凋亡的發(fā)生,其抑制機(jī)制可能與ATRA對(duì)MAPK通路相關(guān)蛋白磷酸化水平的影響有關(guān);同時(shí)ATRA上調(diào)角膜組織緊密連接蛋白ZO-1、occludin的表達(dá),該作用可能與ATRA對(duì)細(xì)胞遷移的抑制有關(guān)。
【圖文】：

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)士論文3.2 TUNEL 檢測(cè) ATRA 對(duì)角膜上皮細(xì)胞凋亡影響大鼠角膜組織冰凍切片 TUNEL 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，角膜上皮凋亡細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察為紅色熒光染色。TUNEL 結(jié)果顯示，ATRA 處理后角膜上皮細(xì)胞凋亡明顯減少，，明顯少于 CT 組和空白組。說(shuō)明 ATRA 治療可明顯較少細(xì)胞凋亡。見(jiàn)圖 2a。

圖 3 ATRA 對(duì)角膜上皮組織凋亡蛋白 bax 表達(dá)與分布的影響 IF 染色 ×100常未損傷角膜；B：角膜損傷 36 h ATRA 0.5 mmol/L 處理角膜；C：角膜損傷 36 h理角膜Fig3 Effects of ATRA on Bax expression in the rats’corneal in different groups analyzed by immunohistochemistry staining. IF staining× 100A:normal corneal；B: corneal treated with 0.5 mmol/L ATRA after 36 hours wound hC:corneal treated with SC after 36 hours wound healing. ATRA 對(duì)角膜上皮組織細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白影響tern blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與 CT 組相比，損傷修復(fù)之后，ATRA 處理角膜中促凋亡蛋白 Bax 表達(dá)量明顯下降，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達(dá)量明顯上調(diào)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R772.2

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本文編號(hào)：2615395