【摘要】：目的：研究神經(jīng)生長因子(nerve growth factor, NGF)在小鼠耳蝸中的表達(dá)分布、以及年齡相關(guān)性變化特點(diǎn),構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3-β-NGF,為老年性耳聾的NGF基因治療提供支持。方法：選取5、7月齡的快速老化小鼠亞系8(Senescence accelerated dementia mouse/prone, SAMP8)作為實(shí)驗(yàn)組,而同齡抗快速老化小鼠亞系1(Senescence accelerated mouse/resistance1, SAMR1)作為SAMP8的正常對照組；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法分別觀察其耳蝸中神經(jīng)生長因子(NGF)的表達(dá)分布情況、以及增齡性變化特點(diǎn)。取胎腦組織50g,提取RNA,經(jīng)RT-PCR、XhoI和HindⅢ雙酶切及T4連接酶連接構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3-β-NGF。結(jié)果：1、NGF在小鼠耳蝸的表達(dá)分布、以年齡相關(guān)性變化特點(diǎn)：在小鼠耳蝸中,神經(jīng)生長因子在螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、內(nèi)外毛細(xì)胞、聽神經(jīng)纖維及血管紋中均有表達(dá),且螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、以及內(nèi)外毛細(xì)胞為主要表達(dá)部位。耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、以及內(nèi)外毛細(xì)胞NGF免疫組化染色平均光密度值：耳蝸NGF免疫組化染色圖象分析,與對照組比較,第5、7月齡SAMP8小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、以及毛細(xì)胞中的NGF蛋白表達(dá)較同齡SAMR1小鼠明顯降低(P0.05)；各組小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞NGF免疫組化染色平均光密度值分別為：5月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠：0.281±0.005,5月齡對照組SAMR1小鼠：0.420±0.039,7月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠：0.220±0.008,7月齡對照組SAMR1小鼠：0.342±0.017。7月齡SAMP8與5月齡SAMP8進(jìn)行組內(nèi)比較P0.01；7月齡SAMP8與7月齡SAMR1進(jìn)行組間比較p0.01；5月齡SAMP8與5月齡SAMR1進(jìn)行組間比較P0.01有顯著性差異。 各組小鼠耳蝸毛細(xì)胞NGF免疫組化染色平均光密度值分別為：5月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠：0.291±0.007,5月齡對照組SAMR1小鼠：0.410±0.011,7月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠：0.213±0.009,7月齡對照組SAMR1小鼠：0.334±0.012。7月齡SAMP8與5月齡SAMP8進(jìn)行組內(nèi)比較P0.01；7月齡SAMP8與7月齡SAMR1進(jìn)行組間比較P0.01；5月齡SAMP8與5月齡SAMR1進(jìn)行組間比較P0.01有顯著性差異。 2、真核表達(dá)載體pcDNA3-β-NGF的構(gòu)建：人β-NGF與質(zhì)粒載體pcDNA3連接后的重組質(zhì)粒、經(jīng)雙酶切鑒定、以及序列檢測后證實(shí)與人β-NGF序列完全相符。結(jié)論：NGF蛋白在小鼠耳蝸中廣泛表達(dá),并且其表達(dá)水平隨著小鼠年齡增長而降低,說明NGF基因可能與維持耳蝸的功能狀態(tài)有關(guān)。人(3-NGF與質(zhì)粒載體pcDNA3連接后符合人NGF基因序列,可以為在NGF基因水平展開老年性耳聾的防治實(shí)驗(yàn)研究提供支持。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R764

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2583379