【摘要】：研究背景 由于腫瘤、外傷所導致的氣管缺損臨床上至今沒有理想的修復方法。目前,常用的手段是兩端的端端吻合；當缺損過長時,只能利用人工材料修復氣管,由于感染、排斥以及材料的變性等并發(fā)癥限制其在臨床的應用。軟骨組織工程技術的發(fā)展使氣管再生成為可能,在以往成功構(gòu)建管狀軟骨的實驗中,學者們多采用軟骨細胞接種到多孔的支架材料,如PGA等,并在動物體內(nèi)形成軟骨。但是應用支架材料主要存在兩個問題,一是細胞接種效率比較低。由于液體的流動性,很多細胞在接種時容易丟失,細胞分布也不均勻,這對構(gòu)建特定形態(tài)的組織是不利的。二是軟骨細胞材料復合物往往是植入有免疫缺陷的動物體內(nèi)如裸鼠進行構(gòu)建,而當植入具有免疫功能的動物體內(nèi)時,構(gòu)建的組織工程軟骨質(zhì)量常常不如在免疫缺陷動物內(nèi)構(gòu)建的滿意。我們考慮可能是材料直接植入后引起了宿主組織較為強烈的炎癥反應,進而影響了軟骨細胞的功能。我們設想如果將可引起炎癥反應的支架材料去除,利用細胞自身分泌的基質(zhì)將彼此連接起來形成細胞膜片。用細胞膜片的方式可以防止細胞流失,不僅提高細胞利用率,而且避免了材料降解產(chǎn)物對組織形成的影響。目的 研究利用羊耳軟骨細胞形成軟骨細胞膜片構(gòu)建無細胞支架組織工程管狀軟骨的可行性。方法 取羊耳軟骨組織,膠原消化法獲得軟骨細胞。體外培養(yǎng)擴增羊耳軟骨細胞至第2代(P2),通過以0.5×106/mL,1.0×106/mL,1.5×106/mL,2.0×106/mL,2.5×106/mL5個不同密度接種于35mm直徑圓形培養(yǎng)皿,培養(yǎng)7天后來確定哪種細胞密度可以形成軟骨細胞膜片。 將所形成的軟骨細胞膜片均勻包裹于不同的內(nèi)支撐,分別為：打孔圓柱硅膠管,PGA包裹的打孔圓柱硅膠管,未打孔的圓柱硅膠管。然后將軟骨細胞膜片-內(nèi)支撐復合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材檢測。以大體觀察、組織學、免疫組織化學等方法對形成的軟骨進行評價。結(jié)果 P2軟骨細胞經(jīng)高密度接種培養(yǎng)1周后,以2.0×106/mL和2.5×106/mL這兩種軟骨細胞密度接種的可形成具有一定厚度的軟骨細胞膜片,呈乳白半透明狀,有光澤和彈性,可以用鑷子簡單地夾起,并折疊和卷曲,可操作性良好。 軟骨細胞膜片和打孔圓柱硅膠管內(nèi)支撐復合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材可見形成了良好的管狀軟骨,乳白色,有光澤,質(zhì)地均勻,彈性好,具有中等偏硬的硬度。HE染色見軟骨陷窩形態(tài)規(guī)則,番紅0染色及Ⅱ型膠原免疫組化均成陽性表達。由于硅膠管打孔,導致軟骨細胞膜片向孔內(nèi)長入,最終形成的管狀軟骨內(nèi)面凹凸不平。 軟骨細胞膜片和PGA包裹的打孔圓柱硅膠管內(nèi)支撐復合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材可見形成了良好的管狀軟骨,乳白色,有光澤,質(zhì)地均勻,彈性好,具有中等偏硬的硬度。HE染色見軟骨陷窩形態(tài)規(guī)則,番紅0染色及11型膠原免疫組化均成陽性表達。由于硅膠管外面包裹一層PGA,可以阻止軟骨細胞膜片向孔內(nèi)長入,最終形成的管狀軟骨內(nèi)面平整。但是由于PGA未能完全降解,形成的軟骨不均勻,降解部位軟骨形成不良。 軟骨細胞膜片和未打孔的圓柱硅膠管內(nèi)支撐復合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材可見形成了良好的管狀軟骨,內(nèi)表面光滑平整,乳白色,有光澤,質(zhì)地均勻,彈性好,具有中等偏硬的硬度。HE染色見軟骨陷窩形態(tài)規(guī)則,番紅0染色及Ⅱ型膠原免疫組化均成陽性表達。 結(jié)論 軟骨細胞膜片復合硅膠管內(nèi)支撐的方法能形成管狀軟骨,為氣管軟骨的再造提供了新的方法。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R762

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 肖開顏;周廣東;劉偉;崔磊;曹誼林;;組織工程技術修復兔氣管軟骨缺損的實驗研究[J];中華胸心血管外科雜志;2006年01期

，

本文編號：2555131