【摘要】：[背景和目的] 慢性鼻竇炎(Chronic rhinosinusitis, CRS)是上呼吸道一種常見的,多發(fā)的炎癥性疾病,其發(fā)病機(jī)制不明。依據(jù)是否伴有鼻息肉將CRS分為兩大類：不伴鼻息肉的慢性鼻竇炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps, CRSsNP)和伴鼻息肉的慢性鼻竇炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)。嗜酸性粒細(xì)胞炎癥是白種CRSwNP患者的炎癥特點,但在中國患者中,超過一半的CRSwNP表現(xiàn)為非嗜酸性粒細(xì)胞性炎癥。因此,CRSwNP又可分為嗜酸性CRSwNP (Eosinophilic CRSwNP, Eos CRSwNP)和非嗜酸性CRSwNP (noneosinophilic CRSwNP, non-Eos CRSwNP)。不同類型的CRS具有不同的組織重塑形式,并且與CRS的炎癥模式密切相關(guān)。研究表明,不同的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制參與CRSsNP、non-Eos CRSwNP和Eos CRSwNP的發(fā)病。多項研究發(fā)現(xiàn)前列腺素E2(E-prostanoid, EP)受體在白種人阿司匹林不耐受三聯(lián)征(Samter's triad)的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用。然而迄今為止,尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于中國CRS患者的EP受體表達(dá)的研究報道。本實驗比較EP1、EP2、EP3和EP4受體在阿司匹林耐受的不同類型CRS患者(CRSsNP、non-Eos CRSNP和Eos CRSwNP)中的表達(dá),并探討EP受體在CRS發(fā)病機(jī)制中的作用。 [方法] 鼻腔組織標(biāo)本來自12例CRSsNP患者、16例non-Eos CRSwNP、12例EosCRSwNP患者和12例對照組。普通光學(xué)顯微鏡下對HE染色組織切片進(jìn)行觀察,計算黏膜上皮下浸潤的炎癥細(xì)胞數(shù)和腺體數(shù),對間質(zhì)水腫程度進(jìn)行評分。用免疫組織化學(xué)染色S-ABC法檢測四種EP受體的組織表達(dá)。分別用Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測不同組別中EP受體的nRNA和蛋白的表達(dá)。連續(xù)切片免疫組化染色檢測EP和嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(Eosinophil cationic protein, ECP).分析EP受體與嗜酸性粒細(xì)胞之間的關(guān)系。 [結(jié)果] 不同類型的CRS組織病理學(xué)特征各異。免疫組織化學(xué)染色顯示EP受體主要表達(dá)于鼻黏膜上皮、腺體和上皮下炎癥細(xì)胞。EP受體mRNA在組內(nèi)的表達(dá)差異顯示,對照組中EP4、EP2受體較EP3和EP1受體高表達(dá),CRSsNP和non-Eos CRSwNP中EP4受體的表達(dá)明顯增加,EP受體在這三組中的表達(dá)順序為EP4EP2EP3EP1;而Eos CRSwNP組EP2受體表達(dá)顯著下調(diào),EP1受體上調(diào)。EP受體組間比較顯示,與對照組、CRSsNP和non-Eos CRSwNP相比較,EosCRSwNP中EP1受體mRNA和蛋白表達(dá)均上調(diào),而四組間EP2、EP3和EP4受體的表達(dá)無明顯差異。對Eos CRSwNP行連續(xù)切片免疫組化染色示,EP1受體主要表達(dá)于上皮下炎癥細(xì)胞,其中EP1陽性的嗜酸性粒細(xì)胞占EP1陽性總細(xì)胞數(shù)的50%。 [結(jié)論] 國人CRS患者EP1、EP2、EP3和EP4受體的表達(dá)存在差異,并且不同于白種人。Eos CRSwNP中EP1表達(dá)較non-Eos CRSwNP、CRSsNP和對照組顯著增加。Eos CRSwNP中EP1的表達(dá)上調(diào)可能與大量的嗜酸性粒細(xì)胞等浸潤有關(guān)。四種EP受體在不同類型CRS發(fā)病中的功能有待進(jìn)一步研究。 [背景和目的] 鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)的發(fā)病機(jī)制不明,越來越多的研究認(rèn)為CRSwNP是受多種因素共同作用的結(jié)果。既往的研究發(fā)現(xiàn)息肉組織中EP受體參與CRSwNP的發(fā)病,而EP受體的表達(dá)受多種生理和病理性刺激的調(diào)控。吸煙是呼吸道炎癥的一個主要的危險因素,在CRSwNP發(fā)病中是否起作用尚存爭議,但大多數(shù)研究認(rèn)為吸煙引起或加重CRSwNP的炎癥反應(yīng),其機(jī)制仍不明確。有研究表明香煙煙霧可以通過改變氣道和外周血炎癥細(xì)胞的EP受體的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng),但香煙煙霧對CRSwNP中EP受體表達(dá)的影響并不清楚。本實驗將CRSwNP患者分為主動吸煙(Smoking CRSwNP, S-NP)組和不吸煙(Non-Smoking CRSwNP, N-NP)組,通過比較研究EP1、EP2、EP3和EP4受體在兩組疾病組織中的表達(dá)的差異,探討吸煙與EP受體的關(guān)系,從而進(jìn)一步闡明吸煙與CRSwNP發(fā)生之間的關(guān)系。 [方法] 息肉標(biāo)本來自21例S-NP和28例N-NP患者。分別對兩組息肉組織切片行HE染色、Alcian blue杯狀細(xì)胞染色、Masson膠原纖維染色和中性粒細(xì)胞髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)免疫組化染色。光學(xué)顯微鏡下觀察S-NP組和N-NP組息肉標(biāo)本組織病理學(xué)特點,計算鱗狀上皮化生陽性率、上皮杯狀細(xì)胞數(shù),固有層中浸潤的炎癥細(xì)胞(嗜酸性粒細(xì)胞、MPO+中性粒細(xì)胞、單個核細(xì)胞)和腺體數(shù),對間質(zhì)水腫程度和基底膜厚度進(jìn)行評分,纖維化水平以膠原纖維百分比表示。用免疫組織化學(xué)染色檢測四種EP受體的組織表達(dá)。分別用Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測息肉組織中EP受體的mRNA和蛋白的表達(dá)。 [結(jié)果] N-NP組和S-NP組均可見上皮增生、杯狀細(xì)胞增生、基底膜增厚、間質(zhì)水腫、大量炎癥細(xì)胞浸潤(PMNs、單個核細(xì)胞等)。與N-NP組相比,S-NP組鱗狀上皮化生率、杯狀細(xì)胞計數(shù)、總炎癥細(xì)胞計數(shù)顯著增加。S-NP組間質(zhì)膠原纖維百分率比例較N-NP組更高(P=0.07)。兩組嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)、單個核細(xì)胞計數(shù)、基底膜厚度評分、黏膜下腺體數(shù)和間質(zhì)水腫評分,無統(tǒng)計學(xué)差異。免疫組織化學(xué)染色示兩組間EP受體亞型的表達(dá)定位相同。EP受體mRNA在組內(nèi)的表達(dá)差異顯示,N-NP組EP2受體的表達(dá)顯著低于EP1、EP3和EP4受體(EP4EP3EP1P2); S-NP組中EP2的相對低表達(dá)差異更明顯(EP3EP1EP4P2).同一EP受體不同組間比較,S-NP組較N-NP組EP2、EP4受體mRNA和蛋白表達(dá)顯著下調(diào),而EP1和EP3受體表達(dá)無顯著差異。 [結(jié)論] S-NP組織炎性病變比N-NP組更加明顯,香煙煙霧并未改變EP受體的組織定位。S-NP和N-NP組織中EP2的相對低表達(dá)可能與息肉形成有關(guān)。主動吸煙可能通過下調(diào)鼻黏膜組織中EP2、EP4受體的表達(dá),參與CRSwNP的發(fā)生和發(fā)展。 [背景和目的] 眾多炎癥介質(zhì)與CRSwNP的發(fā)病機(jī)制關(guān)系密切。研究證實TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子在鼻腔息肉組織或鼻分泌物中表達(dá)增加,在鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。我們前期工作中發(fā)現(xiàn)S-NP組織中EP2和EP4受體較N-NP組顯著降低,S-NP的組織重塑如鱗狀上皮化生、杯狀細(xì)胞增生、間質(zhì)纖維化程度比N-NP組更重,并且S-NP中炎癥細(xì)胞浸潤更加明顯。提示吸煙因素可能通過改變呼吸道黏膜中EP受體的表達(dá),介導(dǎo)靶細(xì)胞的活化促進(jìn)炎癥因子的廣泛合成,進(jìn)而參與CRSwNP慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展。吸煙對CRSwNP患者鼻腔組織局部和血清中細(xì)胞因子的影響鮮有報道。本部分實驗進(jìn)一步對比S-NP組和N-NP組息肉組織和血清TNF-α、IL-6的含量,并研究促炎因子的產(chǎn)生與吸煙指數(shù)(SI)是否有相關(guān)性。 [方法] 息肉和靜脈血清標(biāo)本來自21例主動吸煙(Smoking CRSwNP, S-NP)組,和28例不吸煙(Non-Smoking CRSw NP, N-NP)組。吸煙指數(shù)(smoking index,SI)計算方式為每天吸煙的包數(shù)x吸煙年限。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)分別檢測不同組別息肉組織和血清中IL-6和TNF-α的水平,并與SI作相關(guān)性分析。 [結(jié)果] S-NP組鼻息肉組織TNF-α含量比N-NP組顯著增高,IL-6水平雖無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.06),但S-NP組表達(dá)水平更高。N-NP組和S-NP組血清TNF-α、IL-6濃度無顯著差異。Spearman相關(guān)分析組織TNF-α和IL-6含量與SI均無相關(guān)性。 [結(jié)論] S-NP息肉組織中促炎因子IL-6和TNF-α含量高于N-NP組,與S-NP的更重的炎性改變有關(guān),與吸煙的強(qiáng)度可能無關(guān)。香煙煙霧是否通過降低EP2、EP4受體的表達(dá),促進(jìn)組織結(jié)構(gòu)細(xì)胞或炎癥細(xì)胞合成和釋放IL-6和TNF-α等促炎因子,從而導(dǎo)致CRSwNP的發(fā)生發(fā)展,有待進(jìn)一步研究。 [背景和目的] 人外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)在多種炎癥性疾病中發(fā)揮著重要作用,單個核細(xì)胞浸潤是慢性炎癥性疾病的病理特征之一。CRSwNP組織中單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的聚集增加,與趨化因表達(dá)顯著增高有關(guān)。研究表明單核/巨噬細(xì)胞中EP1、EP2、EP3和EP4受體均有表達(dá),而且受病理生理機(jī)制調(diào)控。我們前期研究發(fā)現(xiàn)EP受體廣泛表達(dá)于息肉組織中浸潤的炎癥細(xì)胞,吸煙鼻息肉組織中EP2、EP4受體的表達(dá)降低,可能與CRSw NP的炎癥反應(yīng)有關(guān)。吸煙是否影響CRSwNP患者PBMC中EP受體的表達(dá)進(jìn)而影響單個核細(xì)胞的功能,目前尚無相關(guān)的報道。本實驗中,我們比較S-NP組和N-NP組PBMC的EP受體表達(dá)的差異,并進(jìn)行PBMC體外香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)刺激實驗,明確香煙煙霧是否誘導(dǎo)PBMC的EP受體表達(dá)變化,并促進(jìn)PBMC釋放促炎因子。 [方法] 1.靜脈血標(biāo)本來自21例主動吸煙(Smoking CRSwNP, S-NP)組,和28例不吸煙(Non-Smoking CRSw NP, N-NP)組。用Ficoll密度梯度離心法提取PBMC。分別用Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測并比較兩組PBMC中EP受體的mRNA和蛋白的表達(dá)。 2.細(xì)胞體外刺激實驗血液標(biāo)本采自6例N-NP患者,用Ficoll密度梯度離心法提取PBMC。用不同濃度CSE(0%、0.1%、1%、10%)刺激體外培養(yǎng)的PBMC24小時,分別用Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測不同濃度組PBMC中EP受體mRNA和蛋白的表達(dá)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)分別檢測不同濃度CSE組上清中TNF-α、IL-6含量。 [結(jié)果] 1.PBMC的EP受體mRNA在S-NP組內(nèi)的表達(dá)顯示,EP4受體表達(dá)顯著高于EP1、EP2和EP3受體,EP2受體表達(dá)顯著高于EP1和EP3,而EP1和EP3mRNA的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(EP4P2EP1EP3)。N-NP組內(nèi)的EP受體表達(dá)與S-NP組相似。S-NP組和N-NP組組間比較EP受體(mRNA和蛋白)的表達(dá)均無統(tǒng)計學(xué)差異。 2.PMBC體外刺激實驗Real-time PCR結(jié)果 不同濃度的CSE(0.1%、1%、10%)刺激PBMC細(xì)胞24小時后,EP1、EP2、EP3和EP4受體mRNA的表達(dá)變化如下。 2.1EP1受體mRNA的表達(dá)與對照組相比均顯著增加(P0.05)。 2.2EP2受體mRNA的表達(dá)與對照組相比均降低,統(tǒng)計學(xué)分析顯示10%CSE組與對照組相比有顯著差異(P0.05)。 2.3EP3受體mRNA的表達(dá)與對照組相比均增加,統(tǒng)計學(xué)分析顯示CSE(1%、10%)組與對照組相比有顯著差異(P0.05)。 2.4EP4受體mRNA的表達(dá)與對照組相比均顯著降低,統(tǒng)計學(xué)分析顯示1%CSE(P0.05)和10%CSE組(P0.01)與對照組相比有顯著差異。 3.細(xì)胞體外刺激實驗Western blot結(jié)果 3.1EP1受體蛋白條帶的灰度值隨CSE濃度增加逐漸增強(qiáng),10%CSE組與對照組相比顯著增強(qiáng)(P0.05)。 3.2EP2受體蛋白條帶的灰度值顯示10%CSE組與對照組相比顯著減弱,0.1%CSE.1%CSE與對照組相比無明顯差異(P0.05)。 3.3EP3受體蛋白條帶的灰度值10%CSE組與對照組相比顯著增強(qiáng),有顯著差異(P0.05)。 3.4EP4受體蛋白條帶的灰度值1%CSE、10%CSE組與對照組相比顯著減弱(P0.05)。 4.PMBC體外刺激實驗ELISA檢測結(jié)果 與對照組相比,不同濃度CSE(0.1%、1%、10%)刺激PBMC24h后TNF-α、IL-6含量呈劑量依耐性升高。1%CSE和10%CSE刺激組上清中TNF-α、IL-6含量與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異。 [結(jié)論] S-NP和N-NP組間PBMC的EP受體表達(dá)無明顯差異,S-NP的EP受體表達(dá)下調(diào)可能限于組織局部。CSE通過上調(diào)N-NP患者PBMC中EP1和EP3受體的表達(dá),下調(diào)EP2和EP4受體,促進(jìn)PBMC的活化并生成TNF-α和IL-6。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R765.25

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本文編號：2458026