【摘要】：目的 1.檢測淚腺腺樣囊性癌(ACC)組織中膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF), GDNF家族受體α1(GFRα-1)、酪氨酸激酶受體(Ret)和神經(jīng)細胞粘附因子(NCAM)以及凋亡抑制蛋白(Survivin)的表達,并觀察其與淚腺ACC組織嗜神經(jīng)侵襲(PNI)等生物學行為之間的關(guān)系,以及彼此之間的相關(guān)性。 2.研究GDNF對體外培養(yǎng)人腺樣囊性癌細胞(ACC-2)增殖和遷移的影響,為進一步明確GDNF在淚腺腺樣囊性癌PNI機制提供實驗依據(jù)。 3.分別探討人腺樣囊性癌細胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白質(zhì)和]mRNA表達的相關(guān)性,進一步了解它們在淚腺ACC PNI微環(huán)境中的相互作用與關(guān)系,為臨床尋找控制早期PNI的有效靶點提供參考依據(jù)。 方法 1.免疫組織化學SABC法檢測51例淚腺ACC患者手術(shù)標本和5例正常淚腺組織中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表達狀況。 2.通過MTT法、繪制細胞生長曲線,以及流式細胞術(shù)檢測不同濃度(時間)的GDNF對人腺樣囊性癌細胞(ACC-2)增殖和凋亡的影響；Transwell小室法研究不同濃度(時間)的GDNF對人腺樣囊性癌細胞(ACC-2)遷移能力的影響。 3.分別通過(?)Vestern Blotting蛋白印跡法和RT-PCR法檢測一定濃度的GDNF對人腺樣囊性癌細胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM以及Survivin蛋白質(zhì)和]nRNA表達的影響。 結(jié)果 1.淚腺ACC組織中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表達率依次為62.7%(32/51)、62.7%(32/51)、54.9%(28/51)、60.8%(31/51)、60.8%(31/51),顯著高于淚腺正常組織；實體型ACC、復發(fā)組ACC的嗜神經(jīng)侵襲率顯著高于腺樣-管狀型ACC、原發(fā)組ACC的嗜神經(jīng)侵襲率,差別具有統(tǒng)計學意義(P0.05),有/無疼痛組ACC間嗜神經(jīng)侵襲率的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.實體型ACC組織中NCAM、Survivin的表達率顯著高于其在腺樣-管狀型ACC組織中的表達率,復發(fā)組ACC組織中GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表達率顯著高于其在原發(fā)組ACC組織中的表達率,有嗜神經(jīng)侵襲組ACC中GDNF GFRα-1、Ret、NCAM的表達率顯著高于其在無嗜神經(jīng)侵襲組ACC中的表達率,上述差別均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3.淚腺ACC組織中GDNF的陽性表達與GFRα-1、Ret、NCAM的陽性表達均具有明顯相關(guān)性,GDNF的陽性表達與Survivin的陽性表達無明顯相關(guān)性。 4.標準培養(yǎng)48h,GDNF濃度在20～120ng/ml之間,可促進ACC-2細胞系的增殖,與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),其中,80ng/ml的GDNF促進ACC-2增殖作用最明顯。在第72h,80ng/ml GDNF促進ACC-2細胞系的增殖作用最顯著(P0.05)。上述結(jié)果與80ng/ml GDNF作用下的ACC-2細胞生長曲線的趨勢一致。 5.標準培養(yǎng)48h后,應用流式細胞儀檢測,80ng/ml GDNF干預組ACC-2細胞中的G1期ACC-2細胞比例較對照組減少,S期ACC-2細胞比例較對照組增加。 6.標準培養(yǎng)40h, GDNF在60～160ng/ml濃度下促進ACC-2細胞遷移(P0.05),其中,160ng/ml的GDNF促進ACC-2遷移作用最強。從第24h起,100ng/ml GDNF在各時間點(24h,30h,40h)均可明顯促進ACC-2細胞系遷移,與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 7.80ng/ml GDNF能夠一致性上調(diào)ACC-2細胞的GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白質(zhì)和(?)m RNA的表達,下調(diào)了ACC-2細胞中GDNF m RNA和蛋白質(zhì)的表達。 結(jié)論 1.淚腺ACC具有嗜神經(jīng)侵襲性生物學行為,嗜神經(jīng)侵襲現(xiàn)象可作為淚腺ACC預后不良的臨床觀察指標之一。 2. GDNF、GFRα-1、Ret在淚腺ACC嗜神經(jīng)侵襲中發(fā)揮重要作用,三者可以作為判斷有無嗜神經(jīng)侵襲現(xiàn)象的生物學指標,而后兩者有望成為預測及評估預后的因素之一。 3. GDNF可以促進體外培養(yǎng)的人ACC-2細胞的增殖和遷移能力,并且分別具有劑量和時間依賴性,但是GDNF對ACC-2細胞的凋亡水平無明顯的調(diào)控作用。 4. GDNF通過GFRα-1-Ret信號傳導途徑,或者通過NCAM這一非依賴Ret的信號途徑,沿著以周圍神經(jīng)為中心的GDNF的濃度梯度,以及憑借NCAM的異/同嗜性粘附作用,使得淚腺ACC組織與周圍神經(jīng)相互吸引,形成了有利于腫瘤嗜神經(jīng)侵襲的微環(huán)境,增強了淚腺ACC腫瘤細胞的神經(jīng)侵襲能力。 5. NCAM的高表達與淚腺ACC的病理類型相關(guān),同時成為判斷淚腺ACC嗜神經(jīng)侵襲行為與預后的指標,通過檢測NCAM在淚腺ACC腫瘤細胞周圍的表達,特別是在腫瘤周圍神經(jīng)中的表達,了解淚腺ACC嗜神經(jīng)侵襲的情況,可能發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞的殘留或早期的神經(jīng)侵犯,以期指導臨床治療。 6. Survivin的表達與淚腺ACC的病理類型、預后密切相關(guān),卻與淚腺ACC的嗜神經(jīng)侵襲現(xiàn)象無明顯的相關(guān)性；Survivin與GDNF可能具有促進ACC-2細胞增殖的協(xié)同作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R739.7

【參考文獻】

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本文編號：2411802