發(fā)布時間：2018-06-11 15:51

  本文選題：剝奪性弱視 + 貓　； 參考：《廣西醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：弱視的發(fā)生對兒童視力影響很大，若不采取及時的治療將會導致終身視力缺陷。目前國內外臨床上多采用左旋多巴（L-dopa）治療弱視，文獻報道其已取得了一定的成功。然而，左旋多巴治療存在外周副作用較大、耐受性差、藥效波動等缺點。鑒于早期實驗，本課題組已經合成新型的左旋多巴衍生物左旋多巴甲酯（LDME）。本研究的目的是觀察不同劑量的LDME對剝奪性弱視貓模型的影響，評價其治療弱視的主要藥效學作用，并探討LDME的可能作用機制。 方法：初生家養(yǎng)幼貓（2-4wk）30只隨機分為6組（每組5只）：左旋多巴甲酯高劑量組（LDME_H）、中劑量組（LDME_M）、低劑量組（LDMEL）、陽性藥L-dopa對照組、正常對照組（NC）、弱視模型對照組（AM）。除了正常組外，于4 wk時參照Hubel經典實驗方法對各組幼貓進行麻醉后的左眼單純上下瞼縫合建立剝奪性弱視。12周后經圖形視覺誘發(fā)電位（P-VEP）確定形成弱視后,灌胃給與左旋多巴甲酯20, 40, 80 mg·kg~(-1)，陽性對照組給與左旋多巴40 mg·kg~(-1)，正常對照組及模型組均給與等量生理鹽水。每天一次持續(xù)30天。 ①應用圖形視覺誘發(fā)電位（P-VEP）研究左旋多巴甲酯對各組貓視皮質電生理的影響；②進行HE染色、Nissl染色和透射電鏡觀察左旋多巴甲酯給藥組貓視皮質17區(qū)形態(tài)學的變化；③TUNEL檢測法觀察視皮質17區(qū)神經細胞的凋亡情況；④免疫組織化學法檢測視皮質17區(qū)中神經生長因子（NGF）、c-Fos的表達；⑤Western-blot法檢測視皮質17區(qū)中NGF、c-Fos蛋白的表達。⑥熒光定量PCR (FQ-PCR)法檢測視皮質17區(qū)中c-fos mRNA的表達。 結果： 1、視覺電生理研究 P-VEP結果顯示，弱視模型組（AC）中剝奪眼表現(xiàn)為波幅值明顯降低及P100值潛時延長的特征，與同側正常對照眼比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。與弱視模型組比較，藥物治療各組弱視眼P100值潛時逐漸縮短，，其中LDMEH最為明顯，差異有統(tǒng)計學意義（p0.05 and p0.01）；同時藥物治療各組弱視眼振幅有不同程度的升高，有顯著性差異（p0.05 andp0.01）。提示LDME能有效地改善剝奪性弱視貓弱視眼的信號傳導功能。 2、視皮質17區(qū)的形態(tài)學研究 弱視模型組（AC）視皮層17區(qū)的神經元形態(tài)表現(xiàn)為解剖和生理上的損傷。而經L-dopa和LDME治療后，各組視皮層17區(qū)的神經元逐漸修復和再生，表現(xiàn)為Nissl小體和神經細胞數量的增加。 3、LDME對弱視貓模型視皮質17區(qū)細胞凋亡表達的影響 弱視模型組中，神經元細胞發(fā)生了嚴重的DNA鏈斷裂情況，表現(xiàn)為TUNEL陽性細胞數量較多。與模型對照組比較，給藥各組的視皮層17區(qū)神經元凋亡細胞計數均有不同程度的減少。其中LDMEH表現(xiàn)出明顯的抗凋亡的作用，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）。給藥各組都對弱視眼視皮質17區(qū)神經細胞有著一定程度的逆轉細胞凋亡作用，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05and P0.01）。 4、LDME對弱視貓模型視皮質17區(qū)神經生長因子（NGF）表達的影響 與弱視模型組比較，治療各組（包括陽性對照組、左旋多巴甲酯高、中、低劑量組）NGF免疫陽性細胞數量在各層有所增加，層間的差異有統(tǒng)計學意義（P0.01 and P0.05）。與L-dopa對照組比較，同劑量給藥的LDMEM中NGF陽性細胞數多于L-dopa陽性組，提示LDME發(fā)揮了較好的治療作用，但LDMEM低于LDMEH和正常對照組，差異均未見統(tǒng)計學意義。Western blot分析顯示，弱視模型組NGF蛋白的表達明顯少于其他各組（P0.01）。而各治療組中的NGF蛋白的表達逐漸增加。 5、LDME對弱視貓模型視皮質17區(qū)c-fos mRNA表達的影響 FQ-PCR表明，正常組貓視皮層c-fos mRNA表達水平活躍。與正常對照組相比較，弱視模型組弱視貓視皮層c-fos mRNA表達水平明顯下調，差異有顯著性（P0.01）。與弱視模型組相比，治療各組（包括L-dopa和LDME）c-fos mRNA表達水平逐漸上調，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01），而其中LDMEH表達最為明顯（P0.01）。 6、LDME對弱視貓模型視皮質17區(qū)c-Fos蛋白表達的影響 弱視對照組視皮層17區(qū)中c-Fos陽性細胞較少表達，與正常組比較其密度明顯降低，差別有統(tǒng)計意義（P0.01或P0.05）。其中LDMEH陽性細胞密度高于弱視對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）。但與正常對照組比較，LDMEH的c-Fos免疫陽性細胞密度在各層均少于正常組對照組，兩者間未見有統(tǒng)計學差異。Western blot分析顯示，弱視模型組c-Fos蛋白的表達明顯少于其他各組（P0.01）。而各治療組中c-Fos蛋白的表達逐漸增加。結論： ①左旋多巴甲酯明顯縮短剝奪性弱視貓P100波峰潛時和提升P100波幅值，故其具有改善剝奪性弱視貓的信號傳導而恢復視覺功能的作用。 ②左旋多巴甲酯治療具有恢復形覺剝奪弱視視皮質神經元修復、再生能力，促進髓鞘結構髓磷脂的合成進而增強神經沖動的傳導并更好地保護髓鞘。 ③左旋多巴甲酯對弱視視皮層17區(qū)的神經細胞有效地進行抑制凋亡進程。 ④左旋多巴甲酯治療對于形覺剝奪性弱視貓視皮質17區(qū)神經細胞NGF表達的上調與神經細胞數量的增加（尼氏小體數量的增加）、P-VEP中各波值的改善效果相一致。 ⑤左旋多巴甲酯有效促進剝奪性弱視貓視皮質17區(qū)c-fos mRNA水平的上調。 ⑥左旋多巴甲酯有效增加剝奪性弱視貓視皮質17區(qū)c-Fos蛋白的表達。 ⑦左旋多巴甲酯有效恢復視皮質17區(qū)的功能并可作為弱視治療的潛在藥物。左旋多巴甲酯治療弱視的機制可能與其調控視皮質17區(qū)NGF、c-fos的表達而抑制細胞凋亡進程以及促進神經元修復、再生有關。
[Abstract]:Objective : To study the effect of LDME on the model of deprivation amblyopia cats , and to evaluate the possible mechanism of LDME in the treatment of amblyopia .
Methods : 30 rats were randomly divided into 6 groups ( 5 rats in each group ) : high dose group ( LDME _ H ) , medium dose group ( LDME _ M ) , low - dose group ( LDMEL ) , L - dopa control group , normal control group ( NC ) and amblyopia model control group ( AM ) .
( 1 ) Using the visual evoked potential ( P - VEP ) , the effects of methyl levo - dopa methyl ester on the electrophysiology of visual cortex in all groups of cats were studied .
( 2 ) HE staining , Nissl staining and transmission electron microscope were used to observe the morphological changes of 17 area of cat visual cortex in the administration group .
( 3 ) TUNEL assay was used to observe the apoptosis of neurons in the visual cortex .
( 4 ) The expression of nerve growth factor ( NGF ) , c - fos in the optic cortex 17 region was detected by immunohistochemical method .
( 5 ) Western - blot was used to detect the expression of NGF and c - fos protein in 17 regions of optic cortex .
Results :
1 . Visual electrophysiology study
The results of P - VEP showed that in the amblyopia model group ( AC ) , the deprivation - eye performance was obviously reduced and the P100 value was prolonged . Compared with the normal control eye , the difference was statistically significant ( P0.01 ) . Compared with the amblyopia model group , the P100 value of the amblyopia in the group of amblyopia was shortened gradually , among which the LDMEH was the most obvious and the difference was statistically significant ( p < 0.05 and p0.01 ) ;
At the same time , there was a significant difference in the amplitude of amblyopia ( p . 05 andp . 01 ) . It is suggested that LDME can effectively improve the signal conduction function of the amblyopia eye of the deprivation amblyopia cat .
2 . Morphological study of visual cortex 17
The neuronal morphology of the visual cortex 17 area of the amblyopia model group ( AC ) showed anatomical and physiological damage . After treated with L - dopa and LDME , the neurons in each group of visual cortex 17 were gradually repaired and regenerated , showing the increase of Nissl cells and the number of nerve cells .
Effect of 3 銆

本文編號：2005838