本文選題：集落細(xì)胞刺激因子 + 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞��； 參考：《吉林大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：本文通過(guò)試驗(yàn)研究了粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinalganglion cells, RGCs）體外存活的影響，以及對(duì)損傷后RGCs的保護(hù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)中我們首先體外培養(yǎng)了RGC-5細(xì)胞系，，觀察其形態(tài)及性狀，應(yīng)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、Western Blot方法檢測(cè)rhG-CSF干預(yù)后RGC-5活性和增殖的變化及其機(jī)制。結(jié)果表明G-CSF能夠增強(qiáng)體外培養(yǎng)RGC-5的活性、促進(jìn)RGC-5的增殖、誘導(dǎo)RGC-5中STAT3的磷酸化，并且G-CSF-R參與STAT3的活化過(guò)程。提示G-CSF可以通過(guò)G-CSFR途徑誘導(dǎo)RGC-5中STAT3的活化來(lái)達(dá)到促進(jìn)其活性和增殖的目的。 為了更加明確的說(shuō)明G-CSF對(duì)視神經(jīng)的保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)選用了特異性的Thy1.1單克隆抗體聯(lián)合無(wú)血清的神經(jīng)基質(zhì)培養(yǎng)基（NEUROBASALTMMedium）純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，得到細(xì)胞純度可高達(dá)95%。隨后我們應(yīng)用無(wú)血清的神經(jīng)基質(zhì)培養(yǎng)基與含血清的DMEM同時(shí)培養(yǎng)RGCs，進(jìn)行對(duì)比觀察RGCs形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組細(xì)胞的存活率及凋亡率，結(jié)果顯示無(wú)血清的神經(jīng)基質(zhì)培養(yǎng)基可明顯提高RGCs體外存活率及存活時(shí)間，降低RGCs體外凋亡率。這提示我們Thy-1.1單克隆抗體與NEUROBASALTMMedium聯(lián)合應(yīng)用于RGCs的體外純化與培養(yǎng)，可明顯維持體外RGCs的活性并延長(zhǎng)其在體外的存活時(shí)間。 因此利用以上方法體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，在Cocl2誘導(dǎo)的缺氧情況下加入rhG-CSF，應(yīng)用rt-PCR及Wetern Blot方法檢測(cè)RGCs上GAP-43、MAP-2、RhoA、Rock、Bcl-2、Caspase3和Bax蛋白及mRNA表達(dá)量的變化，同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)RGCs的凋亡率，結(jié)果顯示G-CSF可能通過(guò)下調(diào)RhoA、Rock表達(dá)來(lái)增加GAP-43、MAP-2蛋白及mRNA的表達(dá)量，從而促進(jìn)細(xì)胞突起的生長(zhǎng)與修復(fù)，通過(guò)上調(diào)Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)Caspase3和Bax的表達(dá)來(lái)明顯減低RGCs的凋亡率。說(shuō)明G-CSF通過(guò)抗凋亡途徑及增加細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)蛋白表達(dá)量來(lái)保護(hù)損傷后的RGCs。 本文的創(chuàng)新點(diǎn)如下： 1證明了G-CSF可以通過(guò)G-CSFR途徑誘導(dǎo)RGC-5中STAT3的活化來(lái)達(dá)到促進(jìn)RGC-5活性和增殖的目的。 2G-CSF可能通過(guò)下調(diào)RhoA、Rock表達(dá)量及增加GAP-43、MAP-2的表達(dá)量來(lái)促進(jìn)RGCs突起的再生與修復(fù)。
[Abstract]:The effects of granulocyte colony stimulating factor ( G - CSF ) on the in vitro survival of retinal ganglion cells ( RGCs ) and the protective effects of granulocyte colony stimulating factor ( G - CSF ) on retinal ganglion cells ( RGCs ) were studied .

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本文編號(hào)：1861334