本文選題：真菌性角膜炎 + 發(fā)病機制��； 參考：《青島大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的本課題組前期利用免疫活性小鼠研究發(fā)現(xiàn)特異性免疫在真菌性角膜炎(Fungal Keratitis; FK)發(fā)病和轉歸中發(fā)揮重要作用。本研究利用免疫缺陷小鼠進一步探討免疫反應在真菌性角膜炎發(fā)病和轉歸中的作用。 方法選用6-8周齡的正常Balb/c鼠和具有相同遺傳背景及相同周齡的裸鼠(T細胞缺陷),SCID鼠(T、B細胞缺陷)作為研究對象,采用基質(zhì)注射方法分別注射1.0μ1濃度為1×108CFU/ml的白色念珠菌孢子或煙曲霉菌孢子誘導白色念珠菌性角膜炎或煙曲霉菌性角膜炎。在感染后裂隙燈連續(xù)觀察小鼠角膜臨床特征變化,根據(jù)角膜病變深度、病灶范圍、及表面規(guī)則性進行臨床評分。在感染后1、3、7和14天取小鼠眼球進行病理學檢測,用PAS和HE染色分別觀察小鼠角膜組織中真菌菌絲的生長和炎性細胞的浸潤；用CFU計數(shù)角膜組織中活菌數(shù)量的變化；ELISA檢測血漿和角膜組織勻漿液中細胞因子IL17、IFNy和IL10的變化；流式細胞分析各組小鼠脾臟中CD19+和IL10+雙陽性細胞的動態(tài)變化。 結果Balb/c鼠和SCID鼠的生理鹽水對照組發(fā)生極輕度的炎癥,其感染組都發(fā)生典型的白色念珠菌性角膜炎或煙曲霉菌性角膜炎,兩者平均疾病分數(shù)都在感染后第5天達到最高隨后逐漸降低,并且病理切片染色和CFU檢測都顯示在感染后1天和3天時其角膜組織中有大量真菌菌絲生長及大量炎性細胞浸潤,在感染后14天時其角膜組織已無明顯真菌生長,炎癥趨向恢復。而相比于Balb/c鼠和SCID鼠發(fā)生典型的FK,同樣進行真菌孢子注射的裸鼠則不發(fā)生白念菌性角膜炎或煙曲霉菌性角膜炎,僅表現(xiàn)為輕度炎癥(與正常Balb/c鼠的生理鹽水對照組類似),至第7天已恢復正常；并且其角膜組織活菌數(shù)在感染后第1天時已明顯減少,至第5天已檢測不到。Balb/c鼠和SCID鼠生理鹽水對照組的皿漿和角膜勻漿液中IL17和IFN7表現(xiàn)為較低水平且隨時間無明顯變化,但裸鼠感染組中IL17都有早期升高并逐漸回落的趨勢,IFNy則都表現(xiàn)為感染中后期升高趨勢。而相比于Balb/c鼠和SCID鼠的FK組,裸鼠相應FK組的血漿和角膜勻漿液中IL17和IFN7都表現(xiàn)為較低水平且無明顯變化；而IL10則表現(xiàn)為早期較高水平的升高并逐漸回落趨勢；脾臟流式檢測提示IL10由CD19+細胞分泌。在Balb/c鼠FK組中IL10表現(xiàn)為早期較低水平的升高并逐漸回落趨勢,在SCID鼠FK組中檢測不到IL10。 結論在不同動物誘導FK后對不同細胞因子的動態(tài)檢測提示：由非特異性免疫細胞產(chǎn)生的IL17在真菌性角膜炎的發(fā)病中發(fā)揮重要作用;由B細胞分泌的IL10在抑制真菌性角膜炎的發(fā)病中發(fā)揮關鍵作用；由非特異性免疫細胞產(chǎn)生的IFNγ在真菌性角膜炎的轉歸中發(fā)揮重要作用。白色念珠菌性角膜炎和煙曲霉菌性角膜炎發(fā)病和轉歸中關鍵細胞因子的變化趨勢大體類似。
[Abstract]:Objective to investigate the role of specific immunity in the pathogenesis and prognosis of fungal keratitis (FK) in mice. The purpose of this study was to investigate the role of immune response in the pathogenesis and outcome of fungal keratitis in immunodeficient mice. Methods normal Balb/c mice aged 6-8 weeks and nude mice with the same genetic background and the same age were selected as the study subjects. Candida albicans or aspergillus fumigatus spores were injected with 1.0 渭 1 concentration of 1 脳 108CFU/ml to induce Candida albicans keratitis or aspergillus fumigatus keratitis respectively. The clinical features of mouse cornea were continuously observed by slit lamp after infection, and the clinical score was evaluated according to the depth of corneal lesion, the extent of lesion and the regularity of surface. The mycelium growth and inflammatory cell infiltration in the cornea of mice were observed by PAS and HE staining on the 7th and 14th day after infection. The changes of the number of living bacteria in corneal tissue were counted by CFU. The changes of cytokines IL17, IFNy and IL10 in plasma and corneal homogenate were detected by Elisa, and the dynamic changes of CD19 and IL10 double positive cells in spleen of each group were analyzed by flow cytometry. Results mild inflammation occurred in the control group of normal saline in Balb/c and SCID mice, and typical candida albicans keratitis or mycosis fumigatus keratitis occurred in the infected group. The mean disease scores of both groups reached the highest level on the 5th day after infection and then decreased gradually. The pathological section staining and CFU detection showed that there were a large number of fungal hyphae growth and inflammatory cell infiltration in corneal tissue on the 1st and 3rd day after infection. At 14 days after infection, there was no obvious fungal growth in corneal tissue and inflammation tended to recover. However, compared with the typical FKs in Balb/c and SCID mice, the same fungal spores injected in nude mice did not develop albicans keratitis or fumigatus keratitis. There was only mild inflammation (similar to the normal saline control group in Balb/c mice, which had returned to normal on the 7th day, and the number of living bacteria in the cornea decreased significantly on the first day after infection. On the 5th day, the IL17 and IFN7 levels in the dish plasma and cornea homogenate of the control group of normal saline in the Balb / c mice and SCID mice were not detected to be lower and had no obvious change with time. However, in nude mice infected group, IL17 increased in early stage and decreased gradually, while IFNy showed an increasing trend in middle and late stage of infection. Compared with the FK group of Balb/c and SCID mice, the IL17 and IFN7 in plasma and cornea homogenate of nude mice showed lower level and no significant change, while IL10 showed a higher level in the early stage and gradually decreased. Splenic flow cytometry showed that IL10 was secreted by CD19 cells. In the FK group of Balb/c rats, the level of IL10 increased at the early stage and decreased gradually, but IL10 was not detected in the FK group of SCID mice. Conclusion the dynamic detection of different cytokines after FK induction in different animals suggests that IL17 produced by non-specific immune cells plays an important role in the pathogenesis of fungal keratitis. IL10 secreted by B cells plays a key role in inhibiting the pathogenesis of fungal keratitis and IFN 緯 produced by non-specific immune cells plays an important role in the outcome of fungal keratitis. The changes of key cytokines in the pathogenesis and outcome of Candida albicans keratitis and mycelium fumigatus keratitis were similar.
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R772.21

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