本文選題：準(zhǔn)分子激光角膜磨鑲術(shù) + 瓣皺褶　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景近年來屈光手術(shù)發(fā)展迅速,準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)(laser in situ keratomileusis,LASIK)因其痛苦輕、術(shù)后視力恢復(fù)快、視力的可預(yù)測(cè)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)普遍用于臨床,但是LASIK術(shù)后特有的角膜瓣相關(guān)的一系列并發(fā)癥仍是目前LASIK運(yùn)用的主要顧慮之一,其中角膜瓣的皺褶較為常見。目前,關(guān)于角膜瓣皺褶的研究僅局限于分類、病因病機(jī)、處理和預(yù)防等臨床方面,而針對(duì)角膜瓣皺褶的基礎(chǔ)研究報(bào)導(dǎo)甚少。故運(yùn)用組織病理學(xué)方法觀察角膜瓣皺褶組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)學(xué)方面的改變,比較單純LASIK術(shù)后和LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶的愈合情況差異,從而為指導(dǎo)臨床提供可靠的科學(xué)依據(jù)是非常必要的。目的觀察LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶與單純LASIK術(shù)后角膜的組織形態(tài)差異,分析LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶與單純LASIK術(shù)后角膜細(xì)胞酶活性和細(xì)胞因子的表達(dá)差異以及創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的不同,并且對(duì)兔子眼角膜的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,找出可能與角膜瓣皺褶相關(guān)的顯著差異表達(dá)基因,為臨床治療角膜瓣皺褶提供理論依據(jù)。方法新西蘭白兔14只,分為7組,每組2只,其中一只全麻下右眼LASIK術(shù)后人為造成瓣皺褶作為試驗(yàn)組,另一只左眼行單純LASIK術(shù)作為對(duì)照組。在術(shù)后1天、3天、1周、2周、1月、3月和6月時(shí)隨機(jī)選取一組處死取角膜,行蘇木素-伊紅(HE)染色、過碘酸-雪夫氏(PAS)染色、Masson三重染色和免疫組織化學(xué)染色,做組織形態(tài)學(xué)觀察。采用冰凍切片檢測(cè)角膜上皮細(xì)胞的三磷酸腺苷酶(Adenosine triphosphatase,ATP)、葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase,G-6-P酶)活性的變化;并對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行凋亡情況檢測(cè)及周邊角膜上皮增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫組織化學(xué)檢測(cè),探討對(duì)照組與皺褶組的角膜細(xì)胞的生理活性及機(jī)制;檢測(cè)角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量以及白細(xì)胞介素1(IL-1β)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β2)的表達(dá)情況來分析LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目和早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的影響。另外,對(duì)兔角膜轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,篩選對(duì)照組與皺褶組之間的差異表達(dá)基因,并對(duì)差異表達(dá)基因的功能進(jìn)行聚類,分析差異表達(dá)基因編碼蛋白的相互作用關(guān)系。結(jié)果對(duì)照組在術(shù)后早期光鏡下見角膜瓣上上皮及瓣下膠原纖維排列較為規(guī)則,上皮基底膜有細(xì)小皺褶,至術(shù)后二周時(shí)皺褶平緩并逐漸消失,PAS及Masson染色未見明顯陽性深染,免疫組織化學(xué)染色見術(shù)后1個(gè)月之內(nèi)有三型膠原表達(dá),以角膜瓣邊緣上皮栓下尤為明顯。角膜瓣皺褶組在術(shù)后1天時(shí)上皮基底膜呈不規(guī)則波浪形改變,至一周時(shí)角膜瓣下層間交界面基質(zhì)膠原纖維排列紊亂,角膜基質(zhì)全層存在活化的角膜細(xì)胞,至術(shù)后2周時(shí),上皮層數(shù)不等,在波峰處變薄為2-3層,波谷處可增厚至8-12層,還可見2"3全角膜基質(zhì)膠原纖維出現(xiàn)與角膜瓣上皺褶一致的波浪狀走行,術(shù)后1-6個(gè)月時(shí)角膜上皮及基質(zhì)部改變基本同前,角膜瓣下層間模糊不可分辨。PAS染色顯示在各時(shí)間點(diǎn)角膜瓣下層間深染,Masson染色顯示角膜瓣下層間呈棕色深染。免疫組織化學(xué)染色見術(shù)后1周至3個(gè)月時(shí)時(shí)角膜瓣下有三型膠原染色。LASIK術(shù)后皺褶組的角膜上皮細(xì)胞ATP酶、G-6-P酶活性和角膜上皮PCNA陽性細(xì)胞數(shù)與單純LASIK術(shù)對(duì)照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;LASIK術(shù)后5天和7天時(shí),皺褶組的角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯比對(duì)照組的多;在LASIK術(shù)后的一周內(nèi),對(duì)照組的角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目比皺褶組的多,并且在術(shù)后5天和7天時(shí),皺褶組角膜基質(zhì)細(xì)胞中的IL-1β表達(dá)明顯比對(duì)照組的高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在LASIK術(shù)后1天、3天、5天和7天時(shí),皺褶組和對(duì)照組角膜上皮細(xì)胞中的TGF-β2表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外,LASIK皺褶模型組與對(duì)照組的顯著差異表達(dá)基因有210個(gè),其中98個(gè)上調(diào),112個(gè)下調(diào);功能聚類顯示,差異表達(dá)基因主要與一些分子結(jié)合功能、催化活性功能以及細(xì)胞生物學(xué)功能相關(guān);通過PPI網(wǎng)絡(luò)及模塊分析,下調(diào)基因(如ITGA2)和上調(diào)基因(如EGFLAM、COL1A2和COL1A1)可能與LASIK術(shù)后瓣皺褶的發(fā)生有密切關(guān)系。結(jié)論LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶的形態(tài)變化使角膜細(xì)胞凋亡情況更嚴(yán)重,干擾了角膜上皮及深部基質(zhì)的重塑過程,使得上皮及基質(zhì)形態(tài)均隨皺褶發(fā)生相應(yīng)改變,在一定程度上影響了角膜創(chuàng)口的愈合過程,并且還影響了角膜中一些基因的表達(dá)水平。
[Abstract]:Objective To investigate the changes of corneal epithelium in corneal flap after LASIK and to find out the difference between corneal flap and corneal flap after LASIK , and to find out the difference between corneal flap and corneal flap after LASIK . 瀵瑰厰瑙掕啘杞綍緇勬祴搴忔暟鎹繘琛屽垎鏋，

本文編號(hào)：1823152