發(fā)布時(shí)間：2018-04-01 20:31

  本文選題：葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1　切入點(diǎn)：小分子干擾RNA　出處：《南昌大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:建立糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠模型,觀察通過(guò)靶向抑制視網(wǎng)膜上葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(Glucose Transporter-1,GLUT1)對(duì)糖尿病小鼠視網(wǎng)膜葡萄糖含量的影響。方法:36只8周大小的C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分成正常對(duì)照組、糖尿病對(duì)照組和GLUT1小干擾核糖核酸(si RNA)組。腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病模型后,GLUT1si RNA組予以玻璃體腔注射1μL靶向GLUT1的si RNA,正常對(duì)照組和糖尿病對(duì)照組注射等量非靶向性si RNA。建模21周后3組小鼠行免疫印跡法檢查視網(wǎng)膜GLUT1的表達(dá)并測(cè)定比較三組小鼠視網(wǎng)膜的含糖量。結(jié)果:GLUT1在神經(jīng)視網(wǎng)膜層的表達(dá)GLUT1si RNA組較正常對(duì)照組表達(dá)約下降77.00%,僅為糖尿病對(duì)照組的8.07%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。盡管糖尿病對(duì)照組和GLUT1si RNA組視網(wǎng)膜組織含糖量均高于正常對(duì)照組,但GLUT1si RNA組小鼠視網(wǎng)膜含糖量為糖尿病對(duì)照組的50.05%(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;結(jié)論:GLUT1 si RNA可以有效抑制GLUT1在視網(wǎng)膜中的表達(dá),限制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入視網(wǎng)膜,從而降低視網(wǎng)膜含糖量。目的:研究限制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)后對(duì)糖尿病小鼠視網(wǎng)膜光感受器退行性變的影響。方法:將前述3組小鼠行閃光視網(wǎng)膜電圖檢查視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞的功能,通過(guò)免疫熒光共定位法檢查視錐細(xì)胞的密度及形態(tài)改變。行HE染色切片測(cè)量距離視乳頭上下方0.2mm、04mm、0.6mm、0.8mm、1.0mm、1.2mm、1.4mm、1.6mm、1.8mm處視網(wǎng)膜外核層厚度以檢查視桿細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果:糖尿病對(duì)照組和GLUT1 si RNA組小鼠的暗適應(yīng)和明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖發(fā)現(xiàn)a波及b波振幅均低于正常對(duì)照組,但GLUT1 si RNA組較糖尿病對(duì)照組暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖高44.6%和94.9%,明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖高47.59%和42.61%,差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);形態(tài)學(xué)檢查分別發(fā)現(xiàn)GLUT1 si RNA組和糖尿病對(duì)照組小鼠的外核層較正常對(duì)照組薄,而GLUT1 si RNA組的外核層較糖尿病對(duì)照組小鼠厚,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。糖尿病對(duì)照組較GLUT1 si RNA組其視錐細(xì)胞排列更為稀疏,外節(jié)形態(tài)更為短小。結(jié)論:GLUT1 si RNA限制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入視網(wǎng)膜,減輕了糖尿病小鼠視網(wǎng)膜視錐細(xì)胞和視桿細(xì)胞功能和形態(tài)學(xué)退變,對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變光感受器退行性病變產(chǎn)生緩解作用。目的:研究限制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)后對(duì)糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管病變的影響。方法:將前述3組小鼠取視網(wǎng)膜組織行免疫印跡法檢查比較視網(wǎng)膜ICAM-1和TNF-α的表達(dá)水平的改變,異硫氰酸熒光素-刀豆蛋白A行心內(nèi)注射以標(biāo)記粘滯的白細(xì)胞并行視網(wǎng)膜平鋪以計(jì)數(shù)比較視網(wǎng)膜血管白細(xì)胞粘滯,異硫氰酸熒光素-牛血清白蛋白行股靜脈注射并行視網(wǎng)膜平鋪以比較血-視網(wǎng)膜內(nèi)屏障滲漏程度。結(jié)果:糖尿病對(duì)照組和GLUT1 si RNA組小鼠視網(wǎng)膜ICAM-1和TNF-α的表達(dá)均高于正常對(duì)照組(P0.01),但這兩個(gè)炎癥因子在GLUT1 si RNA組表達(dá)僅為糖尿病對(duì)照組的66.14%(P0.05)和54.76%(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)糖尿病對(duì)照組較GLUT1 si RNA組有更多的白細(xì)胞粘附在視網(wǎng)膜血管中,視網(wǎng)膜鋪片發(fā)現(xiàn)糖尿病對(duì)照組較GLUT1 si RNA組其熒光滲漏區(qū)域較多,且滲漏面積也較大。結(jié)論:GLUT1 si RNA限制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入視網(wǎng)膜,減輕了糖尿病視網(wǎng)膜的炎癥反應(yīng)和血-視網(wǎng)膜內(nèi)屏障滲漏,對(duì)糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管病變產(chǎn)生緩解作用。
[Abstract]:Objective: to establish a mouse model of diabetic retinopathy, through the observation of targeted inhibition of retinal glucose transporter -1 (Glucose Transporter-1 GLUT1) effects on retinal glucose levels in diabetic mice. Methods: 36 8 week old C57BL/6 mice were randomly divided into normal control group, diabetic control group and GLUT1 small interfering RNA (Si RNA) group. Intraperitoneal injection of streptozotocin diabetic model, GLUT1si RNA group received intravitreal injection of 1 L RNA targeting Si GLUT1, normal control group and diabetic control group was injected with non targeting Si RNA. after 21 weeks of modeling, 3 mice for Western blot examination of retinal GLUT1 the expression was compared between the three groups of mice retinal sugar. Results: GLUT1 expression in the neural retina layer GLUT1si RNA group compared to the control group the expression decreased about 77%, the control was only diabetes Group 8.07%, the difference was statistically significant (P0.01). Although the diabetic control group and GLUT1si group RNA retinal tissue sugar content were higher than the normal group, but GLUT1si group RNA mouse retina sugar for diabetes control group 50.05% (P0.01), the difference was statistically significant; conclusion: the expression of GLUT1 Si RNA can effectively inhibit GLUT1 in in the retina, limiting glucose transport into the retina, thereby reducing retinal sugar. Objective: To study the limit of glucose transport in diabetic mice after photoreceptor degeneration effect. Methods: the 3 groups of mice by electroretinogram examination of rods and cones function, change the density and morphology of cone test cells by immunofluorescence colocalization. HE staining for measuring distance epipapillary below 0.2mm, 04mm, 0.6mm, 0.8mm, 1.0mm, 1.2mm, 1.4mm, 1.6mm, 1.8mm of retina The thickness of the outer nuclear layer to check as the changes in rod cell morphology. Results: the diabetic control group and GLUT1 Si Group RNA mice scotopic and photopic ERG a wave and b wave amplitude were lower than the normal control group, but the GLUT1 Si RNA group compared with the diabetic control group 44.6% dark adaptation electroretinogram photopic retinal and 94.9%. 47.59% and 42.61% were higher, the differences were statistically significant (P0.01); GLUT1 Si RNA were found in the morphological examination group and diabetes control group in the outer nuclear layer than in the normal control group thin, and the outer nuclear layer of GLUT1 Si in RNA group compared with diabetic control group were thicker, the difference was statistically significant (P0.05) diabetes. Compared with the control group GLUT1 Si Group RNA cones arranged more sparse, shorter form outer segments. Conclusion: GLUT1 Si RNA to limit glucose transport into the retina, reduce the retinal cone cells and diabetic mice Rod cell function and morphological changes, alleviate the effect of diabetic retinopathy caused photoreceptor degenerative diseases. Objective: effects on microangiopathy in diabetic mice retinal glucose transport after the research limitations. Methods: expression level of the 3 groups of mice retinal tissue by immune blotting test comparison of retinal ICAM-1 and TNF- alpha changes fluorescein isothiocyanate, concanavalin A underwent intracardiac injection to mark the viscosity of white blood cell count in parallel each retina retinal vascular leukocyte adhesion, fluorescein isothiocyanate bovine serum albumin were injected into the femoral vein parallel each retina to compare the blood retina barrier leakage degree. Results: the expression of GLUT1 and diabetic control group Si RNA mice retinal ICAM-1 and TNF- alpha were higher than the normal control group (P0.01), but the two GLUT1 Si inflammation in group RNA As only the diabetic control group 66.14% (P0.05) and 54.76% (P0.01), the difference was statistically significant; at the same time, we found that the diabetic control group compared with the GLUT1 Si RNA group had more leukocyte adhesion in the retinal vascular, retinal flatmount diabetic group compared with GLUT1 group RNA si the fluorescence leakage and leakage area more the area is also larger. Conclusion: GLUT1 Si RNA to limit glucose transport into the retina, reduce inflammation and blood retinal barrier leakage in the retina, micro vascular lesions in diabetic mice retina with ease.

【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1

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本文編號(hào)：1697205