本文選題：變應(yīng)性鼻炎　切入點(diǎn)：慢病毒　出處：《武漢大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的：探討鼻腔滴入攜帶microRNA-135a (miR-135a)的慢病毒(lentivirus,Lv)在變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis, AR)小鼠中的作用及其機(jī)制。方法：采用卵清蛋白致敏BALB/c小鼠建立變應(yīng)性鼻炎小鼠模型,生理鹽水為對(duì)照組。采用慢病毒鼻腔給藥系統(tǒng),將Lv miR-135a應(yīng)用于變應(yīng)性鼻炎小鼠模型上。借助酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)血清中總IgE濃度,實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, RT-qPCR)檢測(cè)小鼠鼻黏膜中miR-135a,轉(zhuǎn)錄因子(GATA binding protein3, GATA-3和T-box expressed in T cells, T-bet)的mRNA表達(dá)水平的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T-helper (Th)細(xì)胞極化情況,蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)及肥大細(xì)胞染色方法分析小鼠鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的浸潤(rùn)情況,以及小鼠肺組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況,熒光雙標(biāo)免疫組化法檢測(cè)Lv miR-135a在肥大細(xì)胞中共定位表達(dá)情況。并分別提取正常小鼠與變應(yīng)性鼻炎小鼠的骨髓源肥大細(xì)胞(bone marrow mast cells, BMMCs)比較其miR-135a的表達(dá)情況。用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：ELISA結(jié)果顯示,與正常小鼠相比,變應(yīng)性鼻炎小鼠血清總IgE濃度顯著增加(P0.01),鼻腔滴入Lv miR-135a后血清總IgE濃度明顯減少(P0.01)。鼻腔滴入Lv miR-135a有效下調(diào)了鼻黏膜中GATA-3的mRNA表達(dá)水平(P0.05), T-bet的mRNA和miR-135a表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。同時(shí),流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示鼻腔滴入Lv miR-135a有效調(diào)節(jié)了Th1/Th2的平衡。顯微鏡下觀察到變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞明顯高于正常對(duì)照組(P0.05),經(jīng)鼻腔滴入Lv miR-135a后其數(shù)量明顯減少(P0.05),同時(shí),肥大細(xì)胞在鼻黏膜呼吸區(qū)上皮層和嗅區(qū)固有層分布明顯較高。鼻腔滴入慢病毒后,肺組織無明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。共聚焦顯微鏡下觀察到鼻黏膜肥大細(xì)胞中有Lv miR-135a的表達(dá)。相比于正常小鼠來源的BMMCs, miR-135a在變應(yīng)性鼻炎小鼠的BMMCs中存在差異性表達(dá)。結(jié)論：鼻腔滴入Lv miR-135a能安全有效地緩解小鼠變應(yīng)性鼻炎的炎癥反應(yīng),其機(jī)制可能是靶向調(diào)控了GATA-3的表達(dá)水平,從而影響肥大細(xì)胞活化。以鼻腔滴入Lv miR-135a為給藥系統(tǒng)的治療方法為慢病毒介導(dǎo)的microRNA治療變應(yīng)性鼻炎提供了實(shí)驗(yàn)參考及理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to investigate the role and mechanism of nasal drip of lentivirus lentiviruslvus carrying microRNA-135a miR-135a in allergic rhinitis mice. Methods: an allergic rhinitis mouse model was established by using ovalbumin sensitized BALB/c mice. Normal saline was used as control group. Lv miR-135a was used in allergic rhinitis mouse model with lentivirus nasal delivery system. Serum total IgE concentration was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISAs) by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa). Real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reactionation (RT-qPCR) was used to detect the expression of miR-135a, GATA-3 and T-box expressed in T cells (T-bets) in mouse nasal mucosa. Hematoxylin and eosin (hehe) and mast cell staining were used to analyze the infiltration of eosinophils and mast cells in mouse nasal mucosa and the infiltration of inflammatory cells in the lung tissue of mice. The co-localization of Lv miR-135a in mast cells was detected by fluorescence double labeling immunohistochemical method. Bone marrow mast cells (BMMCs) from bone marrow derived from normal mice and allergic rhinitis mice were extracted to compare their miR-135a expression. SPSS19.0 soft was used to detect the expression of Lv miR-135a in mast cells. The results showed that the Elisa showed that, Compared with normal mice, The serum total IgE concentration of allergic rhinitis mice increased significantly (P 0.01), and the total serum IgE concentration decreased significantly after nasal drip of Lv miR-135a. Nasal drip of Lv miR-135a effectively down-regulated the mRNA expression level of GATA-3 in nasal mucosa (P 0.05), and the mRNA and miR-135a expression levels of T-bet increased significantly (P 0.05). The results of flow cytometry showed that nasal drip of Lv miR-135a effectively regulated the balance of Th1/Th2. Under microscope, it was observed that the eosinophil and mast cells in nasal mucosa of allergic rhinitis mice were significantly higher than that of normal control group (P 0.05), and Lv miR-135a was dripped through nasal cavity. At the same time, The distribution of mast cells in the upper cortex and olfactory lamina propria of nasal respiratory area was higher. The expression of LV miR-135a in mast cells of nasal mucosa was observed under confocal microscope. Compared with BMMC from normal mice, the expression of miR-135a was different in BMMCs of allergic rhinitis mice. It is concluded that nasal drip of Lv miR-135a can relieve the inflammatory response of allergic rhinitis in mice safely and effectively. The mechanism may be that the expression level of GATA-3 is regulated by targeting, thus affecting the activation of mast cells. The nasal drip of Lv miR-135a as the drug delivery system provides an experimental reference and theoretical basis for the treatment of allergic rhinitis with microRNA mediated by lentivirus.
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R765.21

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本文編號(hào)：1693590