本文選題：普通脂質(zhì)微泡　切入點：陽離子脂質(zhì)微泡　出處：《重慶醫(yī)科大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分普通脂質(zhì)及陽離子微泡制備及性能檢測目的構(gòu)建普通脂質(zhì)微泡(NMB)、陽離子微泡(CMB),并檢測其基本物理特征；比較NMB和CMB攜載內(nèi)皮抑素質(zhì)粒(pEZ-M46-ES)的能力。方法采用機械震蕩法構(gòu)建兩種不同的脂質(zhì)微泡,通過在成膜材料中加入DC-膽固醇(DC-cholesterol)使微泡表面帶正電荷從而構(gòu)建陽離子微泡(CMB),光鏡下觀察不同微泡基本形態(tài),并檢測其濃度、粒徑、表面電位及載基因能力等基本特性。結(jié)果NMB、CMB均成功構(gòu)建,光鏡下大小均一,分散度較好；其表面電荷、粒徑及濃度分別為+25.62±4.38 mV,1.64±0.28μm,4.16±0.18×109/ml。固定微泡的濃度為5×108/ml,兩者的載基因量分別為2.01±0.74μg和19.02±0.76μg。結(jié)論NMB及CMB制備成功。第二部分超聲輻照陽離子微泡介導內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞目的研究NMB、CMB攜內(nèi)皮抑素質(zhì)粒在超聲作用下轉(zhuǎn)染HRECs細胞轉(zhuǎn)染效率,以及對細胞周期、體外血管成型及細胞遷移的影響。并與脂質(zhì)體載體進行對比。方法實驗分組：①空白對照組(C)②質(zhì)粒+普通離子微泡+超聲輻照組(NMB)③質(zhì)粒+脂質(zhì)體組(L)④質(zhì)粒+陽離子微泡+超聲輻照組(CMB)。①組以空白對照組,②組以超聲輻照普通微泡介導內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染作為陽性對照,③組以脂質(zhì)體2000介導基因轉(zhuǎn)染作為陽性對照,④組以超聲輻照陽離子微泡介導內(nèi)皮抑素基因進行轉(zhuǎn)染。超聲(1 MHz,1 W/cm2, and 50% duty cycle (DC),30 seconds)作用下轉(zhuǎn)染HRECs,轉(zhuǎn)染后收集細胞行流式細胞檢測轉(zhuǎn)染效率及細胞周期,qPCR及Western-blot分別檢測endostatin, VEGF. bcl-2和bcl-xl mRNA及蛋白表達情況,通過體外血管成型及細胞遷移評價內(nèi)皮抑素質(zhì)粒在不同載體介導轉(zhuǎn)染后的治療效果。結(jié)果 各組轉(zhuǎn)染pEZ-M46-ES質(zhì)粒后24h基因轉(zhuǎn)染率分別為：1.20±0.21%,28.25±0.57%,30.74±7.50%和41.8±8.90%；轉(zhuǎn)染后24h及48h流式細胞術檢測細胞周期顯示CMB組處于G1期的細胞較其他各組明顯增多；MTT檢測結(jié)果顯示CMB組對HRECs的生長曲線較其他各組有明顯抑制作用；qPCR及Western blot檢測顯示CMB組endostatin mRNA及蛋白表達較其他各組明顯增加,而VEGF、bcl-2和bcl-xl的mRNA及蛋白表達較其他各組明顯減少；各組HRECs形成網(wǎng)狀新生血管的數(shù)量分別為26.47±3.52,15.17±1.52,13.19±3.43,8.42±1.02個；各組HREC細胞遷移數(shù)量分別為：30±1.57,22.4±2.07,21.6±2.17,15.4±2.7個。結(jié)論與普通脂質(zhì)微泡和脂質(zhì)體作為基因載體相比,CMB組基因轉(zhuǎn)染效率明顯提高；普通脂質(zhì)微泡與脂質(zhì)體也可增加基因轉(zhuǎn)染效率,但兩者基因轉(zhuǎn)染效率無明顯差別。超聲輻照微泡介導內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染HRECs,可明顯抑制體外血管成型及細胞生長、增殖及遷移。第三部分 內(nèi)皮抑素基因?qū)π∈笠暰W(wǎng)膜新生血管的抑制作用目的分別以脂質(zhì)體、普通微泡和陽離子微泡作為基因載體,后兩者聯(lián)合超聲輻照,介導內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染小鼠視網(wǎng)膜,比較其抑制新生血管的效果并探討其可能機制。方法分別將普通微泡,脂質(zhì)體及陽離子微泡與pEZ-M46-ES質(zhì)粒進行孵育,得到載基因的脂質(zhì)體或微泡。采用高濃度氧誘導C57BL/6J小鼠建立OIR (Oxygen-inducedretinopathy,氧誘導視網(wǎng)膜病變)動物模型。將60只視網(wǎng)膜新生血管模型小鼠,隨機分為以下3組：①質(zhì)粒+普通離子微泡+超聲輻照組(NMB)②質(zhì)粒+脂質(zhì)體組(L)③質(zhì)粒+陽離子微泡+超聲輻照組(CMB)。①組以超聲輻照普通微泡介導內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染,②組以脂質(zhì)體2000介導基因轉(zhuǎn)染,③組以超聲輻照陽離子微泡介導內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染。小鼠視網(wǎng)膜新生血管模型建造后用微量注射器按以上分組右眼玻璃體腔注射基因及載體復合物2μl,①、③組在注射后立即使用超聲輻照眼球。左眼作為對照組(C)。于注射后5天行視網(wǎng)膜組織切片HE染色計數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞核數(shù)目；注射后5、14、28d激光共聚焦顯微鏡下觀察各組pEZ-M46-ES的熒光表達強度,qPCR法檢測各組視網(wǎng)膜組織中endostatin、VEGF、bcl-2和bcl-xl mRNA的表達情況,Western blot法檢測各組視網(wǎng)膜組織中endostati、VEGF、bcl-2和bcl-xl的蛋白表達情況。結(jié)果視網(wǎng)膜組織切片HE染色結(jié)果示CMB組小鼠突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞核數(shù)較其他各組顯著減少,各組細胞核個數(shù)分別為：41.7±6.1,26.1±1.4,23.1±3.5,16.4±1.2個。激光共聚焦顯微鏡下觀察并計算視網(wǎng)膜色素上皮層熒光強度所有數(shù)值的平均值,統(tǒng)計結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后5及14d, NMB組、L組及CMB組的pEZ-M46-ES熒光表達強度均逐漸增強,轉(zhuǎn)染后28d各組pEZ-M46-ES熒光表達強度較第14d減弱,CMB組與NMB組及L組相比有統(tǒng)計學差異；NMB組與L組在轉(zhuǎn)染后5d及14d兩組之間的熒光表達強度無明顯統(tǒng)計學差異,但在轉(zhuǎn)染后28d, NMB組的pEZ-M46-ES熒光表達強度較L組強,其差異具有統(tǒng)計學意義。視網(wǎng)膜組織qPCR及Western blot檢測顯示CMB組endostatin的mRNA及蛋白表達較其他各組明顯增加,而VEGF、bcl-2和bcl-xl的mRNA及蛋白表達較其他各組明顯減少。結(jié)論超聲輻照陽離子微泡介導內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染與普通微泡及脂質(zhì)體相比可顯著加強對小鼠視網(wǎng)膜新生血管生成的抑制作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1;R450

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 游向東,周穎,單江,劉伊麗;蛋白微泡聲學造影劑在缺血再灌注心肌中排空現(xiàn)象及其機制的探討[J];中華超聲影像學雜志;2003年06期

2 李彬,萬明習,王素品;納米包膜造影微泡在脈沖超聲場中的瞬態(tài)非線性特性研究[J];聲學學報;2004年06期

3 張群霞,王志剛,冉海濤,李曉東,鄭元義,景香香;不同超聲強度及微泡對基因和組織作用的實驗研究[J];中華超聲影像學雜志;2005年04期

4 張虎,王宏宇;微泡和超聲 從診斷到治療[J];中國民康醫(yī)學;2005年08期

5 魏倕;謝志行;;帶球殼微泡和空化氣泡的超聲特性研究[J];聲學技術;2007年03期

6 楊莉;劉政;左松;譚開彬;高云華;付赤學;李秋穎;;脂膜微泡結(jié)合凝血酶原復合物的制備[J];中國醫(yī)學影像學雜志;2007年05期

7 劉學兵;王志剛;許川山;夏新蜀;張勇;李攀;冉海濤;譚勇;;一種新型載光敏劑的微泡制備及其基本物理特性研究[J];激光雜志;2008年05期

8 朱蔚;周翔;羅燕;彭玉蘭;田野;王冬梅;柳曉軍;李珂;莊華;解慧琪;;“流動的肺泡?”——超聲諧振微泡定向增加組織局部供氧的理論研究[J];中國醫(yī)學影像技術;2012年10期

9 李彬,萬明習;納米包膜造影微泡的小波檢測技術研究[J];聲學學報;2005年05期

10 徐亞麗;高云華;劉政;譚開彬;付赤學;;微泡超聲爆破助溶血栓機制的離體研究[J];中華超聲影像學雜志;2006年04期

相關會議論文 前10條

1 柳建華;蕭淑宜;何景光;區(qū)文財;邱春花;馮桂英;;微泡聯(lián)合低強度治療超聲對犬睪丸組織及細胞影響的研究[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第九屆全國腹部超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2012年

2 張群霞;王志剛;冉海濤;李曉東;鄭元義;景香香;;不同超聲強度及微泡對基因和組織作用的實驗研究[A];第九屆全國超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2006年

3 姜學平;程茜;錢夢，

本文編號：1596861