本文選題：VEGFR-1　切入點(diǎn)：VEGFR-2　出處：《山東大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景：視網(wǎng)膜新生血管形成(Retina neovascularization)是世界范圍致盲的重要原因,是一系列視網(wǎng)膜疾病的共同特征,如年齡相關(guān)性黃斑變性(Age-related Macular Degeneration,AMD)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(Retinopathy of prematurity,ROP)、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(Diabetic Retinopathy, DR)、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞(Central retinal vein occlusion)、視網(wǎng)膜靜脈周圍炎(Retinal periphlebitis)等,其致病機(jī)制尚不明確。近年來,有關(guān)內(nèi)皮祖細(xì)胞的研究成為熱點(diǎn),越來越多的證據(jù)表明內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)在血管異常和修復(fù)方面均有重要的作用,這些細(xì)胞在視網(wǎng)膜新生血管疾病中所起的關(guān)鍵作用也已被證實(shí),可能為視網(wǎng)膜新生血管疾病的治療提供新的思路。研究表明內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的分化和功能是依賴于環(huán)境因素的,血管生成因子(Agiogenesis factor)如血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)和基質(zhì)衍生因子(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)等作用于內(nèi)皮祖細(xì)胞,使其重新灌注到局部缺血部位。表達(dá)CD34 (CD34+)的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)有分化成內(nèi)皮細(xì)胞和形成正常血管結(jié)構(gòu)的能力,而表達(dá)CD14(CD14+)的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)則不能形成正常的血管結(jié)構(gòu)。目前關(guān)于氧環(huán)境對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)在血管異常和修復(fù)作用的影響機(jī)制方面鮮見報(bào)道。本文深入地探討了氧濃度對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞VEGFR-1、 VEGFR-2和CXCR4受體表達(dá)的影響,證實(shí)氧濃度的變化可以直接或間接地通過影響細(xì)胞的血管生成因子,決定內(nèi)皮祖細(xì)胞的行為分化,從而影響新生血管形成的結(jié)果,為視網(wǎng)膜新生血管的治療提出了一個(gè)潛在的靶向。目的：探討氧濃度對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs) VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體表達(dá)的影響,從而研究治療視網(wǎng)膜新生血管的新途徑。方法：將外周血來源的人內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)隨機(jī)分為數(shù)量相同的21組：其中3組(標(biāo)記為0hr組)為對(duì)照組,細(xì)胞復(fù)蘇后用含有10%胎牛血清(FBS)和20 U/mlDNase I (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)的內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)液HPGM(Lonza Walkersville, Inc. Walkersville, MD)洗滌,即刻做流式細(xì)胞術(shù)、Western Blotting和RT-PCR檢測(cè),其結(jié)果作為基礎(chǔ)對(duì)照。其他各組為4hr低氧組(3組),4hr正常氧組(3組),4hr高氧組(3組),24hr低氧組(3組),24h正常氧組(3組),24h高氧組(3組),分別放入0.2%氧濃度(低氧),5%氧濃度(正常氧)和20%氧濃度(高氧)的細(xì)胞培養(yǎng)箱,在含有10%胎牛血清(FBS)和20 U/ml DNase I (Sigma-Aldrich公司)的細(xì)胞培養(yǎng)液HPGM(Lonza Walkersville公司)中培養(yǎng)4小時(shí)和24小時(shí),迅速收集細(xì)胞。然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組內(nèi)皮祖細(xì)胞表面VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體的數(shù)量；通過Western blotting檢測(cè)各組內(nèi)皮祖細(xì)胞VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體的蛋白含量；通過RT-PCR檢測(cè)各組內(nèi)皮祖細(xì)胞的VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體的mRNA水平。實(shí)驗(yàn)重復(fù)8次,每次21組,共168組。結(jié)果用Graphpad prism 5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。p0.05,差異有顯著性；P0.01,差異有極顯著性。結(jié)果：1.VEGFR-1:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)：細(xì)胞表面受體數(shù)量在24hr高氧組明顯減少,差異有極顯著性(p0.01)。Western blotting檢測(cè)：各組細(xì)胞受體蛋白表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定。RT-PCR檢測(cè)：24hr高氧組和正常氧組細(xì)胞受體mRNA水平明顯降低,差異有顯著性(p0.05)。2. VEGFR-2:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)：細(xì)胞表面受體數(shù)量在4hr高氧組和24hr高氧組明顯減少,差異有顯著性(p0.05)。Western blotting檢測(cè)：4hr高氧組和24hr高氧組受體蛋白表達(dá)明顯降低,差異均有顯著性(p0.05)。RT-PCR檢測(cè)：受體的mRNA水平在24hr正常氧和高氧組明顯降低,差異有顯著性(p0.05)。3. CXCR4:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)：細(xì)胞表面受體數(shù)量在4hr高氧組明顯減少,差異有極顯著性(p0.01)。Western blotting檢測(cè)：各組受體蛋白表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定。RT-PCR檢測(cè)：受體的mRNA水平在各組沒有明顯變化。結(jié)論：1.氧環(huán)境變化對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)表面血管生成因子受體VEGFR-1、 VEGFR-2和CXCR4的數(shù)量以及上述受體的蛋白表達(dá)和mRNA水平均會(huì)產(chǎn)生影響,使其發(fā)生顯著性變化。2.上述變化應(yīng)可決定內(nèi)皮祖細(xì)胞的行為,從而為視網(wǎng)膜新生血管的治療提供一個(gè)潛在的靶向。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R774.1

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1564583