本文選題：Leber遺傳性視神經(jīng)病變　切入點(diǎn)：線粒體DNA突變　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2012年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景： Leber遺傳性視神經(jīng)病變(Leber's Hereditary Optic Neuropathy, LHON)是-種因線粒體功能障礙所導(dǎo)致的母系遺傳疾病,病變主要累及視盤(pán)黃斑束神經(jīng)纖維。該病以雙眼急性或亞急性中央視力喪失為主要特征,發(fā)病人群主要為年輕或成年男性。1871年,德國(guó)眼科醫(yī)生Theodor Leber對(duì)16個(gè)家系的55例患者,進(jìn)行調(diào)查研究后,首先報(bào)告了LHON病的臨床特征,同時(shí)確認(rèn)該病為一種獨(dú)立的遺傳性疾病。在疾病早期,患者大多表現(xiàn)為眼底視神經(jīng)炎,所以稱之為L(zhǎng)eber視神經(jīng)炎；但經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)病程后,后期患者常表現(xiàn)為視神經(jīng)萎縮,因此該病又被稱為L(zhǎng)eber視神經(jīng)萎縮。LHON病的病理機(jī)制迄今為止并未完全闡明,先后有人提出X-連鎖隱性遺傳、常染色體顯性遺傳等觀點(diǎn),但均不能合理得解釋LHON家系的發(fā)病特點(diǎn)和遺傳規(guī)律。后來(lái)細(xì)胞質(zhì)遺傳學(xué)說(shuō)較好的解釋了該病的發(fā)病特點(diǎn)。1988年Wallace找到了細(xì)胞質(zhì)遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ),即線粒體DNA (mitochondrial DNA, mtDNA)突變,并首先報(bào)告了第一個(gè)與LHON相關(guān)的線粒體DNA突變位點(diǎn)11778, Wallace對(duì)9個(gè)家系進(jìn)行了分子生物學(xué)檢測(cè)研究后,證實(shí)了此位點(diǎn)位于ND4基因,并明確了線粒體DNA突變與LHON病的密切關(guān)系,從此為研究LHON的發(fā)病機(jī)制開(kāi)辟了新的方向。人類(lèi)完整的線粒體DNA (mtDNA)為一個(gè)包含有16569個(gè)堿基對(duì)的環(huán)狀DNA分子,能夠自我復(fù)制,是獨(dú)立于核染色體之外的一個(gè)遺傳系統(tǒng)。線粒體DNA的2條鏈,所含的堿基成分不盡相同,一條為輕鏈,另外一條為重鏈,但都具有基因編碼功能：共編碼2類(lèi)rRNA、22種tRNA以及包含13條多肽鏈的mRNA(即細(xì)胞色素-B、-C,氧化酶的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞單位,ATP酶亞單位-6、-8,以及NADH脫氧酶的7個(gè)亞單位：ND1、ND2、ND3、ND4、ND5、ND6、 ND4L)。由此可見(jiàn),線粒體DNA的編碼基因突變,必然導(dǎo)致細(xì)胞的氧化磷酸化過(guò)程發(fā)生障礙,導(dǎo)致細(xì)胞供能不足。在Wallace的研究基礎(chǔ)上,1991年HuoponenK等對(duì)3個(gè)芬蘭家系研究后,發(fā)現(xiàn)了位于ND1基因的3460突變位點(diǎn)；Johns DR等對(duì)來(lái)自于14個(gè)家系的先證者檢查后,發(fā)現(xiàn)了位于ND6基因的14484突變位點(diǎn)[2-3]。G11778A、G3460A、T14484C作為L(zhǎng)HON的原發(fā)突變位點(diǎn)已被眾多學(xué)者們熟知,位于編碼呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ的基因序列,與臨床中95%的LHON病例密切相關(guān)。在中國(guó)的LHON患者中,又以11778突變位點(diǎn)為主(90.9%),相比之下,3460及14484突變位點(diǎn)在我國(guó)的LHON患病人群中,所占的比例較低。之所以認(rèn)為上述3個(gè)突變位點(diǎn)并非人群中的多態(tài)性,而是原發(fā)性突變位點(diǎn)(primary mutation),是因?yàn)檫@些位點(diǎn)單獨(dú)存在即可導(dǎo)致患者出現(xiàn)LHON的臨床癥狀。這些位點(diǎn)參與編碼的呼吸鏈氨基酸,在種屬進(jìn)化過(guò)程中高度保守,并且正常人群中并不存在這些突變。目前已經(jīng)證實(shí),上述3種原發(fā)性突變位點(diǎn)以外的多種線粒體DNA的單堿基點(diǎn)突變與LHON發(fā)病相關(guān),這些突變位點(diǎn)被稱之為線粒體繼發(fā)性突變位點(diǎn),已發(fā)現(xiàn)了30多個(gè),中國(guó)人中包括3394、9438、4216等；但3種線粒體DNA原發(fā)性突變位點(diǎn)(G3460A、G11778A、T14484C)是導(dǎo)致失明的危險(xiǎn)因素。然而,在該病發(fā)生的性別偏倚、不完全外顯性、病理機(jī)制等方面,仍存在很多疑問(wèn)。例如,張清炯等的研究發(fā)現(xiàn),中國(guó)人攜帶11778位點(diǎn)的家系成員中并非全部受累,僅有52.3%的男性和13.8%的女性出現(xiàn)臨床表現(xiàn)。但是繼發(fā)性突變位點(diǎn),核基因背景以及單倍體型差別等理論均無(wú)法完全解釋LHON的病因、臨床表現(xiàn)以及不同家系中成員的發(fā)病特征差異。 因病因和確切的發(fā)病機(jī)制未完全闡明,迄今為止對(duì)于LHON尚無(wú)有效的防治措施。大量視功能?chē)?yán)重喪失的患者亟待救治,更有大量的遺傳高危人群企盼著有效的預(yù)防措施。通過(guò)對(duì)LHON的家系研究發(fā)現(xiàn),相當(dāng)多攜帶原發(fā)性突變位點(diǎn)的家系存在不完全外顯性,并且相同突變位點(diǎn)的不同家系其外顯率存在差異,而且家系間患者臨床表現(xiàn)也存在相當(dāng)大的差異。因此提示繼基因突變之后,環(huán)境因素、基因修飾等因素在臨床表現(xiàn)中被發(fā)現(xiàn)起著重要的作用,且僅存在線粒體DNA突變可能并不足以導(dǎo)致突變位點(diǎn)攜帶者發(fā)病,亦即可能存在一個(gè)觸發(fā)因素即“二次打擊”環(huán)節(jié)。如果該環(huán)節(jié)發(fā)生在家系成員出生以后,我們就有可能找到預(yù)防發(fā)病的措施；如果該環(huán)節(jié)發(fā)生在出生以前,我們也有可能找到治療該疾病的有效手段。研究發(fā)現(xiàn),LHON患者的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡過(guò)程可能與Fas/FasL介導(dǎo)的凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)。在Fas/FasL介導(dǎo)的凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中,Caspase-8是啟動(dòng)凋亡的因子,并參與到Fas介導(dǎo)或非Fas介導(dǎo)的凋亡過(guò)程中。因此我們推測(cè),“二次打擊”的環(huán)節(jié)可能與Caspase-8基因的表達(dá)相關(guān),而在其轉(zhuǎn)錄、翻譯至表達(dá)的過(guò)程中,Caspase-8基因的甲基化狀態(tài)占有十分重要的地位。 最新的研究結(jié)果提示：在含最常見(jiàn)及最嚴(yán)重的LHON突變型G3460A、 G11778A cybrid(胞質(zhì)雜種)細(xì)胞對(duì)Fas誘導(dǎo)凋亡的敏感性明顯增高,cybrid細(xì)胞線粒體生成的reactive oxygen species (ROS)明顯增多,而ROS直接參與了凋亡的發(fā)生。目前凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中了解得最為深入的是經(jīng)典的Fas/FasL介導(dǎo)的凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。根據(jù)sFasL可以刺激細(xì)胞表面Fas受體啟動(dòng)細(xì)胞凋亡途徑這一特性,本實(shí)驗(yàn)使用sFasL作為凋亡誘導(dǎo)物,與已進(jìn)入細(xì)胞周期的外周血單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng),從而了解家系中患者、單純攜帶者、正常成員及家系外對(duì)照組研究對(duì)象在相同凋亡誘導(dǎo)條件下其凋亡率有無(wú)差別,尤其是在家系患者與單純攜帶突變位點(diǎn)但未發(fā)病者之間的差異性,從而為研究相同線粒體基因背景卻發(fā)病狀態(tài)不同這一問(wèn)題,提供可能的依據(jù)。z-VAD-fmk作為一種不可逆的caspase8抑制劑,可以在蛋白水平抑制caspase8的酶活性。本研究根據(jù)其這一特性,結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果將z-VAD-fmk預(yù)處理LHON患者外周血單個(gè)核細(xì)胞,并使用sFasL對(duì)細(xì)胞群誘導(dǎo)凋亡,分析細(xì)胞在z-VAD-fmk處理組與未處理組其凋亡率的差異,探討caspase8抑制劑z-VAD-fmk在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起到的可能作用,處理前后兩個(gè)階段凋亡率的差異性,尋找抑制細(xì)胞凋亡的有效手段,從而為探討LHON遺傳高危人群有效地防治手段提供思路。 研究目的： 1.對(duì)于來(lái)自中國(guó)江西的一個(gè)LHON大家系進(jìn)行眼科檢查及分子生物遺傳學(xué)檢測(cè),了解該家系病患者線粒體DNA點(diǎn)突變的形式及遺傳學(xué)特點(diǎn),證實(shí)本研究提出的“二次打擊學(xué)說(shuō)”中的“第一次打擊”的存在,也即針對(duì)3個(gè)原發(fā)性突變位點(diǎn)進(jìn)行分析,探討該家系中是否攜帶目前已知的線粒體DNA原發(fā)性突變位點(diǎn)。 2.檢測(cè)LHON點(diǎn)突變攜帶但未發(fā)病家系成員、LHON患者、家系中未攜帶突變位點(diǎn)的成員和正常對(duì)照組(家系外未患此疾病人群)Caspase-8基因甲基化或去甲基化狀態(tài)、Caspase-8蛋白質(zhì)的表達(dá),探討Caspase-8基因去甲基化狀態(tài)在這四組研究對(duì)象中有無(wú)差異,是否可能成為L(zhǎng)HON發(fā)病的一個(gè)因素。 3.結(jié)合前期的研究成果,探討四組研究對(duì)象其外周血淋巴細(xì)胞對(duì)sFasL誘導(dǎo)凋亡的反應(yīng)性差異,并探討z-VAD-fmk在抑制患者外周血單個(gè)核細(xì)胞凋亡率方面的作用。 研究方法： 1.眼科檢查：先建立臨床診斷標(biāo)準(zhǔn),然后分別進(jìn)行視力、眼壓、裂隙燈生物顯微鏡、改良的定量Amlser方格、FM100-Hue色覺(jué)檢查法、Humphrey750型視野計(jì)等視功能的對(duì)比研究,然后對(duì)研究對(duì)象擴(kuò)瞳后用全視網(wǎng)膜鏡、多功能眼底圖象處理系統(tǒng)及OCT3檢測(cè)脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)的改變。 2.遵循知情同意原則,對(duì)家族內(nèi)成員及家系外未患此疾病正常人群抽取其外周靜脈血,分離淋巴細(xì)胞,分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC,包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞),制備DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物純化測(cè)序,鑒定線粒體DNA G3460A、 G11778A、T14484C等位點(diǎn)的突變。 3.根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將下一步研究對(duì)象分為：家系人員LHON患病成員、突變基因攜帶但未發(fā)病成員和家系內(nèi)未攜帶突變位點(diǎn)的正常成員及家系外正常人,根據(jù)入選標(biāo)準(zhǔn)對(duì)以上四組人群再次進(jìn)行外周血采集,分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),提取細(xì)胞總蛋白,使用western-blot方法檢測(cè)Caspase-8蛋白表達(dá)含量,比較四組人群的Caspase-8蛋白表達(dá)是否存在差異性。 4.循前述實(shí)驗(yàn)步驟,提取四組人群的外周血單個(gè)核細(xì)胞,提取各組人群的基因組DNA,亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA,進(jìn)行Caspase-8基因甲基化PCR檢測(cè),根據(jù)結(jié)果分析四組人群中的Caspase-8基因甲基化程度差異。 5.在sFasL凋亡誘導(dǎo)處理各組研究對(duì)象后,分別測(cè)定四組研究對(duì)象的外周血單個(gè)核細(xì)胞的凋亡率,并比較組間差異。 6.對(duì)Leber遺傳性視神經(jīng)病變患病成員的外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行z-VAD-fmk預(yù)處理,并檢測(cè)分析預(yù)處理組與未處理組在sFasL凋亡誘導(dǎo)處理后的細(xì)胞凋亡率,并比較組間差異。 研究結(jié)果： 1.家系中存在24名基因突變位點(diǎn)攜帶者,其中有11名患者,他們發(fā)病后的視力介于光感至0.01之間,其中10名患者的視力損害級(jí)別為極重度。LHON患者的平均發(fā)病年齡為24.36歲,其中最大發(fā)病年齡為50歲,最小發(fā)病年齡為8歲。而攜帶有突變位點(diǎn)但至今未發(fā)病的人群,平均年齡為40.38歲,其中最大年齡為72歲,最小年齡為5歲。LHON患者的發(fā)病年齡與突變位點(diǎn)攜帶者的年齡相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=2.102,P=0.049)。家系患者共同特點(diǎn)是以嚴(yán)重的視力損害為主,未發(fā)現(xiàn)合并其他眼科疾病以及耳聾、共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)系統(tǒng)合并癥。僅一例雙眼視力下降的時(shí)間間隔為一周,其余患者均為雙眼同時(shí)漸進(jìn)性視力下降,不伴眼痛等其他不適。本研究家系中所有患者的視力均低于0.01,且迄今為止未見(jiàn)任何視功能恢復(fù)情況。對(duì)患者進(jìn)行雙眼眼底熒光素血管造影檢查,結(jié)果顯示：雙眼視盤(pán)盤(pán)面毛細(xì)血管始終未見(jiàn)熒光充盈,晚期僅見(jiàn)盤(pán)沿?zé)晒庵?無(wú)熒光遮蔽、視網(wǎng)膜血管無(wú)滲漏,并未表現(xiàn)出病程早期典型的視神經(jīng)乳頭周?chē)臏\層毛細(xì)血管擴(kuò)張,視網(wǎng)膜血管迂曲擴(kuò)張等癥狀,可能是因?yàn)椴〕梯^長(zhǎng)視神經(jīng)已萎縮所致。 2.經(jīng)采集樣本的72名母系家族成員中,有24名同時(shí)攜帶有G11778A和T14502C兩個(gè)突變位點(diǎn),其中的11名為L(zhǎng)HON患者,11名LHON患者中男性10名,女性1名,男：女=10：1,其他13名攜帶者至今并未發(fā)病,其余家系成員以及對(duì)照組研究對(duì)象均未攜帶上述突變位點(diǎn)。所有研究對(duì)象中均未發(fā)現(xiàn)G3460A和T14484C兩個(gè)突變位點(diǎn)。 3.對(duì)家系中LHON患病成員、攜帶突變基因但未發(fā)病成員和家系內(nèi)未攜帶突變位點(diǎn)的正常成員及家系外正常人四組人群外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)進(jìn)行Caspase-8蛋白western-blot方法檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn),四組組間存在差異(F=16.124,P=0.000),LSD法兩兩比較結(jié)果：LHON患病成員組caspase8表達(dá)水平較高,LHON患病成員caspase8蛋白條帶與相應(yīng)GAPDH條帶灰度比值較其他三組升高顯著(P=0.000),突變基因攜帶但未發(fā)病成員、家系內(nèi)未攜帶突變位點(diǎn)的正常成員及家系外正常人三組人群caspase8蛋白條帶與相應(yīng)GAPDH條帶灰度比值差異兩兩比較其差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.514、0.506、0.988)。 4.對(duì)四組人群進(jìn)行Caspase-8基因甲基化程度研究,結(jié)果顯示：組間存在差異(X2=20.466,P=0.000),對(duì)資料進(jìn)行兩兩比較,將檢驗(yàn)水準(zhǔn)調(diào)整為a=0.007,患病成員組Caspase-8基因非甲基化狀態(tài)陽(yáng)性率高于其余三組,組間差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.001、0.000、0.000)。 5. sFasL對(duì)單個(gè)核細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用的研究： 采用Annexin V-FITC和PI雙染下流式細(xì)胞術(shù),對(duì)經(jīng)過(guò)sFasL誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行凋亡水平定量檢測(cè),結(jié)果顯示：采用sFasL誘導(dǎo)后,每個(gè)組單個(gè)核細(xì)胞的凋亡率與自身陰性對(duì)照樣本相比均有增加(t=18.877,P=0.000)。四組研究對(duì)象細(xì)胞經(jīng)sFasl誘導(dǎo)后凋亡率存在差異(F=3.024,P=0.036),LSD法兩兩比較結(jié)果：與突變基因攜帶但未發(fā)病成員、家系內(nèi)未攜帶突變位點(diǎn)的正常人及家系外正常人這三組研究對(duì)象相比,家系內(nèi)Leber遺傳性視神經(jīng)病變患病成員的單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)sFasl誘導(dǎo)后凋亡率升高顯著(P分別為0.010、0.017、0.110)。但除去LHON患者的剩余三組研究對(duì)象,其在細(xì)胞凋亡率方面的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 6.通過(guò)z-VAD-fmk預(yù)處理后,對(duì)Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行sFasL凋亡誘導(dǎo)后的凋亡率進(jìn)行研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在sFasL的誘導(dǎo)下,與患者研究對(duì)象組的細(xì)胞凋亡率相比,在適當(dāng)劑量的z-VAD-fmk干預(yù)下,患者研究對(duì)象組的同樣細(xì)胞樣本,其細(xì)胞的凋亡率降低,前后差異顯著,其干預(yù)組與非干預(yù)組的凋亡率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.904,P=0.003) 研究結(jié)論： 1.該家系患病成員共同特點(diǎn)是以嚴(yán)重的視力損害為主,家系中攜帶者的突變位點(diǎn)為G11778A及T14502C,且迄今為止所有患者均未出現(xiàn)視力恢復(fù)情況,這一情況與國(guó)外對(duì)攜帶G11778A位點(diǎn)家系的報(bào)道相一致,即患者視力損害嚴(yán)重,恢復(fù)或好轉(zhuǎn)者罕見(jiàn),預(yù)后差。但在國(guó)內(nèi)研究報(bào)告中,G11778A突變患者,其中52.1%發(fā)病視力介于0.01與0.1之間,30.3%視力高于0.1,最終恢復(fù)率可達(dá)6.8%。與以上研究相比,本研究家系在臨床表現(xiàn)及疾病預(yù)后方面,較單純攜帶11778位點(diǎn)的家系差,因此G11778A可能與T14502C位點(diǎn)存在一定的協(xié)同作用。 2.本研究結(jié)果顯示本家系LHON的平均發(fā)病年齡為24.36歲,除兩例患者發(fā)病年齡大于35歲,其余患者發(fā)病年齡與國(guó)外報(bào)告的15-35歲一致,家系患者性別比例男：女=10：1,存在嚴(yán)重的性別偏倚。不完全外顯性是LHON疾病的重要特征,本家系的外顯率為45.8%,即許多攜帶有基因突變位點(diǎn)的家系成員即使明顯大于平均發(fā)病年齡但迄今并未發(fā)病。說(shuō)明僅僅存在線粒體DNA原發(fā)性突變位點(diǎn)并不足以導(dǎo)致攜帶者發(fā)病,作為必要條件的“第一次打擊”尚不充分,可能需要“二次打擊”環(huán)節(jié)。同時(shí)“二次打擊”與“第一次打擊”互相之間應(yīng)該具有足夠強(qiáng)大的協(xié)同效應(yīng)。 3.作為參與Fas介導(dǎo)及非Fas介導(dǎo)凋亡途徑的Caspase-8,其在家系患者中外周血單個(gè)核細(xì)胞中蛋白表達(dá)明顯高于單純攜帶未患病者以及正常人群。有研究實(shí)驗(yàn)表明,與正常細(xì)胞相比,原有LHON病理性突變的細(xì)胞對(duì)Fas介導(dǎo)的凋亡更加敏感。這表明本家系中患者體細(xì)胞內(nèi)的Caspase-8蛋白表達(dá)異常升高,可能與攜帶線粒體DNA突變位點(diǎn)的細(xì)胞,在病理?xiàng)l件下更容易發(fā)生細(xì)胞凋亡相關(guān)。 4.家系中LHON患病成員,Caspase-8基因非甲基化陽(yáng)性率明顯高于攜帶突變基因但未發(fā)病成員、家系內(nèi)未攜帶突變位點(diǎn)的正常成員及家系外正常人三組研究對(duì)象。這表明由于Caspase-8基因甲基化狀態(tài)很大程度上影響了基因的轉(zhuǎn)錄效率,從而Caspase-8基因甲基化狀態(tài)可能成為導(dǎo)致攜帶LHON突變位點(diǎn)家系成員發(fā)病的一個(gè)重要因素。 5.家系中LHON患病成員的外周血單個(gè)核細(xì)胞,對(duì)sFasL凋亡誘導(dǎo)處理的敏感性明顯高于攜帶突變基因但未發(fā)病成員、家系內(nèi)未攜帶突變位點(diǎn)的正常成員及家系外正常人三組研究對(duì)象。結(jié)合“結(jié)論3”可以發(fā)現(xiàn),同一家系在攜帶相同線粒體DNA突變位點(diǎn)的基礎(chǔ)上,與單純攜帶者相比,LHON患者組單個(gè)核細(xì)胞不僅在Caspase-8基因非甲基化陽(yáng)性率上明顯升高,而且在同樣凋亡誘導(dǎo)的處理?xiàng)l件下,LHON患者組細(xì)胞凋亡率更高,因此可以推測(cè)Caspase-8基因甲基化狀態(tài)可能是通過(guò)提高細(xì)胞對(duì)凋亡敏感性而使突變位點(diǎn)攜帶者發(fā)病。 6.通過(guò)z-VAD-fmk預(yù)處理,對(duì)sFasL誘導(dǎo)的LHON患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞凋亡過(guò)程有保護(hù)作用,且作用顯著,能夠明顯降低細(xì)胞在面對(duì)凋亡誘導(dǎo)處理時(shí)的凋亡率。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R774.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周和政,黃震f^;Leber氏遺傳性視神經(jīng)病變的臨床研究進(jìn)展[J];華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志;2004年06期

2 林其誰(shuí);線粒體與細(xì)胞凋亡[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);1999年02期

3 張蔚,楊文武,劉元姣,洛若愚;宮頸癌組織中Fas、FasL及caspase-8表達(dá)及其臨床意義[J];實(shí)用癌癥雜志;2003年03期

4 薛軍;林茂芳;;調(diào)控抗凋亡基因survivin表達(dá)的因素研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2005年06期

5 胡靜;何小軍;馮永東;楊長(zhǎng)永;韓中博;龔建平;;正常人外周血淋巴細(xì)胞凋亡受體的表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2007年03期

6 杜利平;馬旭;金學(xué)民;;Leber遺傳性視神經(jīng)病變11778突變家系異質(zhì)性的研究[J];眼科研究;2009年07期

7 胡義德,錢(qián)桂生,陳維中,黃桂君,李淑平,胡建林;人白細(xì)胞線粒體DNA的快速分離與鑒定[J];中華血液學(xué)雜志;1997年11期

8 張清炯,郭向明,賈小云,肖學(xué)珊,郭莉,黎仕強(qiáng);線粒體DNA11778突變所致Leber遺傳性視神經(jīng)病變外顯率分析[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2001年06期

9 王燕,郭向明,賈小云,黎仕強(qiáng),肖學(xué)珊,郭莉,張清炯;中國(guó)人Leber遺傳性視神經(jīng)病變的原發(fā)突變及臨床特征[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2005年03期

10 黃建綱,滿淑真,張波;Leber氏家族遺傳性視神經(jīng)萎縮[J];實(shí)用眼科雜志;1991年11期

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本文編號(hào)：1561303