本文關(guān)鍵詞： 真菌性角膜炎 中性粒細(xì)胞 凋亡 小鼠　出處：《青島大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探究凝集素樣氧化性低密度脂蛋白受體-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein recepter-1,LOX-1)調(diào)控真菌性角膜炎中性粒細(xì)胞凋亡機(jī)制。方法:該實(shí)驗(yàn)分別在真菌性角膜炎小鼠體內(nèi)動(dòng)物模型和培養(yǎng)的小鼠腹腔提取中性粒細(xì)胞真菌刺激的體外細(xì)胞模型上研究調(diào)控真菌性角膜炎中性粒細(xì)胞凋亡機(jī)制。隨機(jī)將健康的C57BL/6小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和煙曲霉菌感染組,分別于0、1天、3天、5天觀察小鼠角膜感染情況后處死小鼠,收集小鼠的角膜,采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠角膜中促進(jìn)凋亡的基因Fas、FasL,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9mRNA和抑制凋亡的基因Bc L-2mRNA的表達(dá)情況,免疫熒光技術(shù)檢測(cè)角膜中中性粒細(xì)胞的浸潤和活化的Caspase-3蛋白的表達(dá)情況以及TUNEL技術(shù)檢測(cè)角膜中細(xì)胞的凋亡情況。用LOX-1的中和抗體和IgG或LOX-1的抑制劑Poly I和PBS預(yù)處理,然后用煙曲霉菌菌絲去感染小鼠的角膜,分別在0、0.5天、1天、3天、5天觀察小鼠角膜的感染情況后處死小鼠,收集小鼠的角膜,檢測(cè)阻斷和抑制LOX-1后小鼠角膜中促進(jìn)凋亡的基因Fas、FasL,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9mRNA和抑制凋亡的基因BcL-2mRNA的表達(dá)情況,角膜中浸潤中性粒細(xì)胞的染色和活化的Caspase-3蛋白的表達(dá)情況以及角膜中凋亡細(xì)胞的染色。從C57BL/6小鼠腹腔中提取分離中性粒細(xì)胞,煙曲霉菌菌絲刺激中性粒細(xì)胞0、4h、8h、12h、16h后觀察細(xì)胞情況并收集細(xì)胞,采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠角膜中促進(jìn)凋亡的基因Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9m RNA和抑制凋亡的基因BcL-2m RNA的表達(dá)情況。從C57BL/6小鼠腹腔中提取分離中性粒細(xì)胞,用LOX-1的中和抗體和IgG或LOX-1的抑制劑Poly I和PBS預(yù)處理,煙曲霉菌菌絲刺激腹腔提取分離中性粒細(xì)胞8h,,運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)阻斷和抑制LOX-1后中性粒細(xì)胞中促進(jìn)凋亡的基因Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9m RNA和抑制凋亡的基因BCL-2mRNA的表達(dá)情況,采用蛋白質(zhì)印跡和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中性粒細(xì)胞中活化的Caspase-3蛋白的表達(dá)情況以及中性粒細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果:感染C57BL/6小鼠角膜與正常角膜相比,促進(jìn)凋亡的基因Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9mRNA的表達(dá),浸潤中性粒細(xì)胞數(shù)目,活化的caspase3蛋白和TUNEL-陽性細(xì)胞數(shù)目均顯著增高,相反,凋亡抑制的基因BCL2mRNA的水平顯著降低。采用LOX-1中和抗體和抑制劑Ploy I處理后,對(duì)比IgG或PBS對(duì)照組,C57BL/6小鼠角膜組織中Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8、和Caspase-9mRNA,浸潤中性粒細(xì)胞數(shù)目,活化的caspase3蛋白質(zhì)和TUNEL-陽性細(xì)胞的顯著降低但BCL2mRNA水平升高。在小鼠腹腔提取分離中性粒細(xì)胞中,對(duì)比單純未刺激組,煙曲霉菌菌絲刺激后促進(jìn)凋亡的基因Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9mRNA、和促進(jìn)凋亡BCL-2mRNA的表達(dá)均增高,而且8h煙曲霉菌菌絲刺激后凋亡基因增高最顯著。與中性粒細(xì)胞中的IgG或PBS處理后的對(duì)照組相比,用中和抗體或抑制劑PloyI處理后,Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9mRNA的表達(dá)明顯降低而BCL2mRNA表達(dá)增多,活化的caspase3蛋白,和凋亡的中性粒細(xì)胞顯著減少。結(jié)論:在煙曲霉菌感染小鼠角膜或刺激小鼠腹腔提取分離中性粒細(xì)胞后中性粒細(xì)胞的凋亡增高,而抑制LOX-1可以減少煙曲霉菌感染的小鼠角膜中性粒細(xì)胞的促凋亡的基因和抗凋亡基因,半胱天冬酶-3激活和中性粒細(xì)胞細(xì)胞凋亡。說明LOX-1抑制是通過減少Fas和Fas配體的結(jié)合,增加BCL-2的表達(dá)以及抑制炎癥中半胱氨酸蛋白酶級(jí)聯(lián)的活化,從而抑制胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)并減少中性粒細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R772.21

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Kun He;Li-Hui Yue;Gui-Qiu Zhao;Cui Li;Jing Lin;Nan Jiang;Qian Wang;Qiang Xu;Xu-Dong Peng;Li-Ting Hu;Jie Zhang;;The role of LOX-1 on innate immunity against Aspergillus keratitis in mice[J];International Journal of Ophthalmology;2016年09期

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本文編號(hào)：1505263