本文關(guān)鍵詞：A2E在藍(lán)光致人RPE細(xì)胞損傷過程中對(duì)溶酶體膜通透性的影響

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【摘要】：目的:本課題擬通過建立A2E及藍(lán)光誘導(dǎo)RPE細(xì)胞損傷模型,探討A2E在藍(lán)光致人RPE細(xì)胞損傷過程中對(duì)溶酶體膜通透性的影響,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。方法:(1)采用MTT法檢測(cè)不同濃度A2E負(fù)載RPE細(xì)胞培養(yǎng)不同時(shí)間后RPE細(xì)胞活力,確立A2E負(fù)載RPE細(xì)胞的最適宜濃度;(2)利用熒光顯微鏡觀察RPE細(xì)胞分別負(fù)載濃度為0、10、25、50μM A2E后RPE細(xì)胞中熒光強(qiáng)度變化;(3)將細(xì)胞分為四組:對(duì)照組、單純藍(lán)光光照組、A2E負(fù)載組、A2E負(fù)載+藍(lán)光光照組。TUNEL法、流式細(xì)胞儀檢測(cè)RPE細(xì)胞凋亡情況;(4)吖啶橙(AO)標(biāo)記,運(yùn)用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察A2E負(fù)載后RPE細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜通透性變化并利用共聚焦軟件對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行分析。結(jié)果:(1)MTT比色法顯示,A2E(10μM、25μM、50μM)作用于RPE細(xì)胞12h、24h、48h、72h,細(xì)胞增殖率隨濃度增加出現(xiàn)下降趨勢(shì)。當(dāng)A2E負(fù)載濃度為10μM時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)12h、24h、48h、72h時(shí),與對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.821,0.641,0.406,0.572);當(dāng)A2E負(fù)載濃度為25μM、50μM時(shí),在細(xì)胞培養(yǎng)12h時(shí),與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.169,0.058);當(dāng)A2E負(fù)載濃度為25μM、50μM時(shí),在24h時(shí),OD值分別為(0.423±0.035)、(0.349±0.010),低于對(duì)照組(0.508±0.035),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,0.000);當(dāng)A2E負(fù)載濃度為25μM、50μM時(shí),在48h時(shí),OD值分別為(0.544±0.042)、(0.439±0.086),低于對(duì)照組(0.688±0.064),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028,0.002);當(dāng)A2E負(fù)載濃度為25μM、50μM時(shí),在72h時(shí),OD值分別為(0.661±0.021)、(0.430±0.082),低于對(duì)照組(0.878±0.032),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,0.000)。因此,我們選擇濃度為25μM的A2E負(fù)載于RPE細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。(2)不同濃度A2E負(fù)載RPE細(xì)胞后,熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)隨著A2E的負(fù)載濃度增加,RPE細(xì)胞胞漿內(nèi)熒光強(qiáng)度逐漸由綠色變?yōu)辄S色。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè):對(duì)照組RPE細(xì)胞凋亡率(3.39±0.15%)、A2E負(fù)載組凋亡率(4.61±1.44%)、單純藍(lán)光光照組(8.21±0.52%)、藍(lán)光+A2E負(fù)載組(24.77±1.49%)。各組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=130.292,P=0.000)。光照組、A2E負(fù)載+藍(lán)光光照組凋亡率高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004,0.000);A2E負(fù)載組與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.348);A2E負(fù)載+光照組較光照組及A2E負(fù)載組凋亡率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,0.000);光照組較A2E負(fù)載組凋亡率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.019)。(4)TUNEL法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況:對(duì)照組(10.40±2.46%)、A2E負(fù)載組(24.07±1.17%)、單純藍(lán)光光照組(43.00±4.41%)、A2E負(fù)載+光照組(53.00±4.50%)。各組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=92.423,P=0.000)。A2E負(fù)載組、光照組、A2E負(fù)載+藍(lán)光光照組凋亡率高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001,0.000,0.000);A2E負(fù)載+光照組較光照組及A2E負(fù)載組凋亡率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007,0.000);光照組較A2E負(fù)載組凋亡率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。(5)光照組、A2E負(fù)載組、A2E負(fù)載+光照組與對(duì)照組比較紅色顆粒狀熒光均減弱,胞漿的綠色熒光增強(qiáng)。利用Leica Confocal Software(LCS Lite)進(jìn)行熒光強(qiáng)度分析,4組平均熒光強(qiáng)度(紅色)分別為:對(duì)照組(37.00±1.30)、光照組(29.48±0.62)、A2E負(fù)載組(32.37±0.72)、A2E負(fù)載+光照組(22.16±0.73)。各組間整體平均熒光強(qiáng)度比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=246.955,P=0.000)。光照組、A2E負(fù)載組及A2E負(fù)載+光照組均低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,0.000,0.000);光照組低于A2E負(fù)載組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);A2E負(fù)載+光照組低于光照組、A2E負(fù)載組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,0.000)。結(jié)論:(1)A2E負(fù)載RPE細(xì)胞的最適宜濃度為25μM。(2)藍(lán)光光照、A2E聯(lián)合藍(lán)光光照可導(dǎo)致RPE細(xì)胞凋亡,且兩者具有協(xié)同作用。(3)A2E、藍(lán)光光照、A2E聯(lián)合藍(lán)光光照可導(dǎo)致RPE細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜通透性增加。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R774

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 李海輝;蔡善君;宮鑫;武志鵬;呂建平;宿罡;謝兵;;藍(lán)光對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞α1D亞基蛋白表達(dá)及分泌VEGF和bFGF的影響[J];中華眼科雜志;2014年11期

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本文編號(hào)：1209172