本文關(guān)鍵詞：CMC-TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽納米載體體外轉(zhuǎn)染效果評估

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【摘要】：目的構(gòu)建羧甲基殼聚糖-TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽納米載體(CTNs),探究CTNs介導(dǎo)miR96轉(zhuǎn)染293細(xì)胞和耳蝸基底膜的效率及安全性,為mi R96在內(nèi)耳的功能研究奠定基礎(chǔ)。方法應(yīng)用羧甲基化的殼聚糖(CMC)與TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽合成CTNs,攜帶標(biāo)記花青染料熒光(cy3)的mi R96模擬物(mi R96 mimics),轉(zhuǎn)染293細(xì)胞和耳蝸基底膜,利用激光共聚焦熒光顯微鏡對293細(xì)胞和耳蝸基底膜鋪片進(jìn)行熒光陽性細(xì)胞計(jì)數(shù),以陽離子脂質(zhì)體作為對照,評價(jià)轉(zhuǎn)染效率,采用MTT試驗(yàn)評價(jià)CTNs的安全性。結(jié)果成功制備了CTNs,納米顆粒平均直徑約186.6nm,粒徑分布集中,無明顯聚集現(xiàn)象;CTNs-mi R96-cy3轉(zhuǎn)染293細(xì)胞的平均陽性細(xì)胞率為32.6%,轉(zhuǎn)染耳蝸基底膜毛細(xì)胞的平均陽性細(xì)胞率為24.4%,均低于陽離子脂質(zhì)體-mi R96-cy3;MTT試驗(yàn)示CTNs細(xì)胞毒性低于陽離子脂質(zhì)體。結(jié)論 CTNs作為一種新型的納米載體,可攜帶miR96成功轉(zhuǎn)染耳蝸基底膜,提示了納米載體作為miRNA載體的可行性,并且安全性較高,但轉(zhuǎn)染效率不足。
【作者單位】： 中國人民解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科聾病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國科學(xué)院國家納米科學(xué)中心;
【關(guān)鍵詞】： 羧甲基殼聚糖-TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽納米載體 miRNA miR 內(nèi)耳轉(zhuǎn)染
【基金】：國家863青年科學(xué)家項(xiàng)目(2014AA020510) 國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81470683) 中國科協(xié)創(chuàng)新驅(qū)動助力工程(2016CX-QD01) 國家973計(jì)劃重大科學(xué)研究計(jì)劃干細(xì)胞項(xiàng)目(2012CB967900,其子課題:2012CB967901,2012CB967903)
【分類號】：R764.43
【正文快照】： 隨著基因技術(shù)的發(fā)展,研究發(fā)現(xiàn)多種miRNA在小鼠耳蝸中高表達(dá),其中mi R96被證實(shí)與耳蝸毛細(xì)胞的分化、發(fā)育及人類聽力損失密切相關(guān)[1-5]。選擇合適的載體將mi R96遞送至內(nèi)耳是實(shí)現(xiàn)其外源性干預(yù)的關(guān)鍵。最常用的載體為病毒載體和非病毒載體。病毒載體有誘發(fā)免疫反應(yīng)、潛在致癌等風(fēng)

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1067462