發(fā)布時間：2017-10-06 06:28

  本文關鍵詞：不同凍存時間后脂肪組織顆粒細胞存活率的實驗研究

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【摘要】：背景:1893年,有學者首次報道了使用自體脂肪移植術來修復自體軟組織缺陷。但其存在的移植后受區(qū)的高吸收率,是困擾醫(yī)生與患者的一個重大難題。移植后部分的脂肪組織壞死液化,可能是導致自體脂肪移植高吸收率的主要原因。如此高的吸收率,導致需要進行多次自體脂肪移植術,患者承受多次痛苦和再次高消費,脂肪供區(qū)凹凸不平,發(fā)病率和不適感增高的可能性等問題。所以,為了解決這一難題,尋找一種能夠長期保存自體脂肪的方法,對醫(yī)生和患者而言,都是不可或缺的。自1990年Forunier提出了脂肪組織凍存的概念以來,眾多學者進行了一系列關于自體冷凍脂肪的實驗和臨床研究。包括脂肪組織、脂肪細胞和脂肪干細胞的冷凍保存。而且有研究報道,冷凍脂肪的移植相較新鮮脂肪移植而言,術后受區(qū)的水腫和淤青更不明顯。也有關于脂肪冷凍前進行脂肪獲取方法的優(yōu)化;脂肪冷凍時控制冷凍速率并加入冷凍保護劑;在㧟20℃的常用冷凍溫度下,也使用-80℃以及液氮溫度(㧟196℃)下保存脂肪等報道。但是由于常用的冷凍保護劑存在移除困難和部分冷凍保護劑有一定毒性的特點,臨床上添加了冷凍保護劑保存的脂肪,幾乎沒有將其運用于人自體脂肪移植術的報道。有報道稱,在溫度為-20℃,且不控制其冷凍速率而且不使用冷凍保護劑的情況下冷凍脂肪組織時,產生的冷凍損傷是很少的,通過復溫后,仍然發(fā)現(xiàn)了活的脂肪組織,并且在臨床上也得到了應用。近10年來,國內外的學者做了大量關于冷凍脂肪組織的研究和冷凍方法的優(yōu)化。諸多有差異甚至相反的觀點都可以在文獻中找到,且并沒有對冷凍脂肪方法形成一個標準化的理論。而目前國內外關于離心純化人顆粒脂肪組織在常用冷凍低溫不同冷凍時間保存下脂肪細胞存活率的實驗研究還鮮見報道。目的:本次研究將人顆粒脂肪組織與生理鹽水混合液在提純和離心后,置于常用冰箱(㧟20℃)中,凍存不同時間后觀察分析復溫后脂肪組織的的細胞代謝改變、細胞活力等方面,初步探討在常用冷凍低溫保存下脂肪的細胞存活率變化,為冷凍脂肪的進一步優(yōu)化以及標準化,提供相關理論參考和基礎性的實驗依據。方法:抽取獲得經離心純化后的人脂肪組織顆粒,直接置于-20℃冰箱中凍存1個月、2個月、3個月、6個月、9個月、12個月、24個月復溫后取出與新鮮脂肪組織作對比,復溫后觀察脂肪組織顆粒的形態(tài)體積變化,組織石蠟包埋切片he染色觀察細胞結構是否完整,臺盼藍拒染實驗測定脂肪組織顆粒存活率,組織冰凍切片油紅o染色觀察脂肪細胞中脂滴形態(tài),流式細胞術分析細胞凋亡率,葡萄糖轉移量法測定細胞活性。結果:脂肪組織顆粒形態(tài)學觀察顯示,經凍存復溫后的脂肪組織顆粒隨凍存時間的延長,顏色由鮮黃色逐漸變淡,油脂雜質逐漸增多。he染色顯示,凍存1、2個月后的脂肪組織顆粒,組織細胞結構清晰完整,與新鮮脂肪形態(tài)上無明顯差異。凍存3、6、9個月后的脂肪組織顆粒,雖然存在一定的組織細胞結構,但細胞數量和質量逐漸降低。凍存時間為12、24個月后,組織細胞形態(tài)和結構已嚴重破壞。臺盼藍染色經細胞計數儀定量分析后,結果顯示:與新鮮脂肪組織顆粒相比較,脂肪組織顆粒隨著凍存時間的增加,存活率逐漸降低;在凍存1、2個月之后存活率下降的均不明顯,與對照組之間存活率無明顯差異(p0.05);凍存時間為3個月時,存活率開始下降,與對照組之間存活率存在明顯差異(p0.05);凍存時間增加至6個月后,存活率有明顯降低,隨著凍存的時間的增加,存活率逐漸下降;直至凍存時間為24個月的標本,存活率為3.30%±1.54%(p0.05)。流式細胞儀分析細胞凋亡率,結果顯示,凍存時間為1、2個月的脂肪組織顆粒與對照組比較,細胞凋亡比例無明顯差異(p0.05);凍存時間增加為3個月時細胞凋亡比例存在明顯的下降,并隨著凍存時間的延長,細胞凋亡比例逐漸增加,至凍存24個月后,細胞凋亡比例為94.2%±4.55%(p0.05)。油紅o染色結果顯示,新鮮脂肪組織顆粒鏡下存在絕大部分被染紅的脂滴和藍染胞核;凍存時間為1、2個月時鏡下凍存脂肪組織顆粒被染紅的脂滴和藍染胞核數量并未出現(xiàn)明顯變化;凍存時間為3個月時被染紅的脂滴和藍染胞核數量下降,紅色脂滴互相融合成大脂滴;隨著凍存時間的增加,被染紅的脂滴和藍染胞核數量下降明顯,大部分為被染紅的融合大脂滴;至凍存時間為24個月時,鏡下紅色脂滴較少見。葡萄糖轉移量實驗分析細胞活性結果顯示,以新鮮脂肪組織顆粒細胞活性為100%,通過葡萄糖轉移量計算出不同時間凍存脂肪組織顆粒的細胞活性。結果顯示,凍存時間為1、2個月時細胞活性分別為94.7%±4.40%和92.5%±5.10%,細胞活性與對照組無明顯差異(P0.05)。凍存時間增加為3個月時,細胞活性為75.3%±4.80%,細胞活性顯著下降且與對照組存在統(tǒng)計學差異(P0.05)。凍存時間逐漸增加時,細胞活性逐漸下降,至凍存時間為24個月時細胞活性為4.9%±3.20%。結論:離心純化人脂肪組織顆粒在-20℃下凍存2個月內,脂肪細胞存活率與新鮮脂肪組織顆粒無明顯差異。
【關鍵詞】：低溫 人顆粒脂肪組織 冷凍保存 凋亡
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R622.9
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-14
• 第1章 前言14-16
• 第2章 材料與方法16-22
• 2.1 實驗材料16-17
• 2.2 實驗方法17-21
• 2.3 統(tǒng)計分析21-22
• 第3章 結果22-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結論38-40
• 參考文獻40-44
• 附錄44-46
• 文獻綜述46-58
• 參考文獻52-58
• 發(fā)表文章58-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 謝紅炬;鄧穎;李明;羅惠中;陳碾;;自體純化冷凍微粒脂肪注射移植修復面部皮膚軟組織老化性萎縮凹陷[J];中國組織工程研究;2012年05期

2 王華;杜立業(yè);李華;;微生物液氮超低溫保存研究進展[J];食品與生物技術學報;2011年01期

3 雷華,李青峰;抽吸負壓對所抽吸脂肪顆粒活性影響的研究[J];中國美容醫(yī)學;2005年01期

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本文編號：981223