發(fā)布時(shí)間：2017-09-29 14:23

  本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌密度感應(yīng)信號(hào)分子OdDHL對(duì)γδT細(xì)胞合成胰島素樣生長(zhǎng)因子1的影響

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【摘要】：目的探討密度感應(yīng)(QS)信號(hào)分子OdDHL在銅綠假單胞菌(PA)抑制外周血γδT細(xì)胞合成胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)過程中所起的作用及其機(jī)制。方法 (1)分離純化健康成人外周血γδT細(xì)胞,細(xì)胞同步后配成濃度為5×106個(gè)/m L的細(xì)胞懸液放入6孔培養(yǎng)板,每孔2 m L,按隨機(jī)數(shù)字表法將培養(yǎng)板孔分為6組,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,分別加入0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μmol/L濃度OdDHL各20μL,在37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。用WST-l細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)γδT細(xì)胞的活性,用Annexin V/PI雙染檢測(cè)試劑盒檢測(cè)γδT細(xì)胞的凋亡。(2)分離純化健康成人外周血γδT細(xì)胞,細(xì)胞同步后配成濃度為5×106個(gè)/m L的細(xì)胞懸液放入6孔培養(yǎng)板,每孔2 m L,按隨機(jī)數(shù)字表法將培養(yǎng)板孔分為4組,陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,剩余2組分為2個(gè)OdDHL濃度水平處理組,每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔,陽(yáng)性對(duì)照組加入終濃度為10 mg/L的Con A,陰性對(duì)照組加入相應(yīng)體積的PBS。2個(gè)OdDHL處理組在加入終濃度為10 mg/L的Con A后分別加入25、50μmol/L的OdDHL 20μL。在37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。用ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清中IGF-1濃度,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定γδT細(xì)胞TLR4 mRNA,用Western blot法測(cè)定γδT細(xì)胞TLR4蛋白,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)γδT細(xì)胞CD80、CD86的表達(dá)。對(duì)數(shù)據(jù)行F檢驗(yàn)和q檢驗(yàn)。結(jié)果 (1)OdDHL濃度達(dá)到100μmol/L可明顯抑制γδT細(xì)胞活性,提高細(xì)胞的凋亡,而低于50μmol/L的OdDHL卻對(duì)γδT細(xì)胞活性無明顯影響。(2)培養(yǎng)上清中IGF-1在陰性對(duì)照組為(14.32±2.34)μg/m L,在陽(yáng)性對(duì)照組為(139.58±11.73)μg/m L,在25μmol/L的OdDHL處理組為(85.64±7.52)μg/m L,在50μmol/L的OdDHL處理組為(56.49±4.93)μg/m L,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=296.69,P0.05)。(3)γδT細(xì)胞TLR4 mRNA表達(dá)值在陰性對(duì)照組是0.91±0.13;在陽(yáng)性對(duì)照組是5.07±0.72,在25μmol/L的OdDHL處理組是3.36±0.45,在50μmol/L的OdDHL處理組是1.56±0.21,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=107.98,P0.05)。γδT細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)值在陰性對(duì)照組是0.52±0.09;在陽(yáng)性對(duì)照組是2.27±0.51,在25μmol/L的OdDHL處理組是1.14±0.17,在50μmol/L的OdDHL處理組是0.78±0.15,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=41.86,P0.05)。γδT細(xì)胞表面CD80表達(dá)率在陰性對(duì)照組是(3.92±0.49)%;在陽(yáng)性對(duì)照組是(52.65±4.26)%,在25μmol/L的OdDHL處理組是(23.04±2.53)%,在50μmol/L的OdDHL處理組是(12.88±1.65)%,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=586.901,P0.05)。γδT細(xì)胞表面CD86表達(dá)率在陰性對(duì)照組是(1.61±0.15)%;在陽(yáng)性對(duì)照組是(22.03±3.17)%,在25μmol/L的OdDHL處理組是(9.59±1.06)%,在50μmol/L的OdDHL處理組是(5.76±0.95)%,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=231.126,P0.05)。結(jié)論P(yáng)A分泌的QS信號(hào)分子OdDHL可通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞激活來減少γδT細(xì)胞IGF-1的合成,影響全身燒傷創(chuàng)面的愈合。
【作者單位】： 解放軍第九七醫(yī)院燒傷整形科;解放軍第三0九醫(yī)院燒傷整形科;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)菌感染 受體 抗原 T細(xì)胞 γ-δ 胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ 燒傷 傷口愈合
【基金】：2013年南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新課題資助重大項(xiàng)目(ZX09)
【分類號(hào)】：R641
【正文快照】： 創(chuàng)面修復(fù)是燒傷救治的核心與主線,全面深入二、不同濃度Od DHL對(duì)人外周血γδT細(xì)胞的影了解其作用機(jī)制是提高其臨床治療效果的必然要響的測(cè)定求。研究表明,胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like1.人外周血γδT細(xì)胞的獲得、分組及處理:取健growth factors 1,IGF-1)是創(chuàng)面修復(fù)的重要，

本文編號(hào)：942496