本文關(guān)鍵詞：VEGI對腦外傷小鼠小膠質(zhì)細胞的激活與極化影響

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【摘要】：研究目的:近期研究結(jié)果表明,顱腦外傷后腦內(nèi)的炎癥反應(yīng)能加劇繼發(fā)性腦損傷的病理生理過程,這些變化若持續(xù)存在會加重腦水腫的癥狀、增高顱內(nèi)壓、進一步導(dǎo)致神經(jīng)元細胞的凋亡,引起神經(jīng)功能癥狀,極大加重了原發(fā)性腦損傷造成的危害。血管內(nèi)皮細胞生長抑制因子(Vascular Endothelial Growth Inhibitor,VEGI)是腫瘤壞死因子超家族的成員之一,顧名思義,VEGI具有抑制腫瘤新生血管的特性,除此之外,其還在多種疾病中發(fā)揮重要作用。近期,VEGI因在炎癥性腸病中的作用而受到廣泛關(guān)注。因此VEGI除了作用于新生血管抑制腫瘤生長,還能調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和抑制水腫生成。本實驗課題采用的是液壓打擊的方法來制作小鼠閉合性顱腦損傷的模型,在此基礎(chǔ)上我們探討小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞激活和極化的時間點變化,同時我們給予VEGI干預(yù)治療,與對照組相比較觀察VEGI會不會調(diào)控小膠質(zhì)細胞的激活甚至極化。我們也探討給予VEGI干預(yù)后小鼠腦外傷后的腦水腫和神經(jīng)功能的恢復(fù)情況是否有所改善。研究方法:制備腦外傷動物模型的方法有多種,本課題我們采用較為成熟的液壓打擊法(FPI)來制備小鼠閉合性顱腦外傷的模型,所選取的實驗動物為SPF級健康成年雄性小鼠C57老鼠180只,對每只小鼠進行編號,按照隨機數(shù)列表,隨機將小鼠分為假手術(shù)組(Sham組)、腦外傷組(TBI組)、腦外傷后鼠尾靜脈注射VEGI干預(yù)組(TBI+VEGI組)進行實驗研究。其中腦外傷組繼續(xù)分組,根據(jù)傷后時間點的不同,將組內(nèi)小鼠分為傷后1 h、6 h、1 d、3 d、7 d、14 d和21 d組,每組小鼠數(shù)量保持為5只,處死動物取出小鼠腦組織,進行石蠟包埋切片制備成組織切片,采用免疫組化的技術(shù),觀察小鼠創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細胞的浸潤情況。腦外傷后腹腔注射VEGI干預(yù)組(TBI+VEGI組)根據(jù)傷后處死時間點不同,再分為傷后1 d、3 d、5d、7 d組,每組動物5只,按照同樣的方法,觀察VEGI+TBI組小鼠傷灶周圍的小膠質(zhì)細胞變化情況。為了觀察VEGI+TBI組小鼠和TBI組小鼠在腦外傷后第1天和第3天的腦水腫情況,我們采用干濕重的方法進行計算腦組織中的水含量。而血腦屏障的通透性采用伊文氏藍滲透的方法,用熒光密度儀測含量,計算出通透性的大小。神經(jīng)功能情況采用改良神經(jīng)功能評分法(mNSS)的方法,相對可靠客觀。研究結(jié)果:應(yīng)用液壓打擊方法成功建立中度小鼠顱腦損傷模型,用HE染色后每個組小鼠腦組織均觀察到典型的TBI后的病理變化,出現(xiàn)創(chuàng)傷灶。免疫組織化學(xué)染色顯示,小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞被激活,出現(xiàn)不同亞型(M1型和M2型),并且廣義小膠質(zhì)細胞在傷后第7天達到高峰,隨后下降,而M1型和M2型小膠質(zhì)細胞在第5天到達峰值,M1型維持在高值,隨后緩慢下降,M2型高峰后迅速降低。TBI+VEGI組與TBI組相比,在小鼠顱腦外傷后第3天,第5天,第7天TBI+VEGI組小鼠創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細胞的浸潤數(shù)量明顯減少(P0.05)。進一步研究發(fā)現(xiàn),VEGI可以影響小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞的極化,與TBI組相比,TBI+VEGI組小鼠外傷后M1型(CD11C+)小膠質(zhì)細胞數(shù)量明顯減少,而M2型(Arg-1+)小膠質(zhì)細胞數(shù)量則比TBI組明顯增多,各時間點差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。干濕重法觀察發(fā)現(xiàn):小鼠顱腦外傷后,與空白對照組相比,TBI組和TBI+VEGI組腦水含量均明顯增加;在傷后第3,5,7天,給予VEGI干預(yù)的小鼠腦組織中水含量明顯低于單純TBI組,且各個時間點之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。伊文氏藍滲透率實驗發(fā)現(xiàn):在給予VEGI干預(yù)后小鼠血腦屏障的滲透率明顯降低,低于TBI組,兩者之間具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。研究結(jié)論:1、小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞能夠被激活,并在傷后第7天達到峰值,M1型小膠質(zhì)細胞第5天達到峰值,隨后輕微降低,M2型小膠質(zhì)細胞第5天達到峰值,隨后降低。2、小鼠顱腦外傷后腦水腫急劇增加,在第3天達到高峰。3、VEGI減少TBI后小膠質(zhì)細胞的激活,并且可以抑制M1型小膠質(zhì)細胞的激活,增加了M2型小膠質(zhì)細胞的激活,猜測VEGI可以通過調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞的極化來影響外傷后腦內(nèi)炎癥反應(yīng)。4、VEGI通過調(diào)節(jié)TBI腦內(nèi)炎癥反應(yīng),有效減少腦水腫,促進神經(jīng)功能恢復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：血管內(nèi)皮生長抑制因子 創(chuàng)傷性腦損傷 小膠質(zhì)細胞 免疫 炎癥 腦水腫
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R651.15
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語11-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、顱腦外傷小鼠小膠質(zhì)細胞的激活與極化時間變化16-32
• 1.1 對象和方法16-24
• 1.1.1 實驗動物及分組16
• 1.1.2 實驗儀器16-18
• 1.1.3 實驗試劑18-19
• 1.1.4 小鼠液壓打擊模型的制備19-20
• 1.1.5 小鼠腦組織石蠟切片的制備20-22
• 1.1.6 腦組織石蠟切片免疫組織化學(xué)染色方法22-24
• 1.1.7 統(tǒng)計學(xué)方法24
• 1.2 結(jié)果24-29
• 1.2.1 建立小鼠中型顱腦損傷模型24-25
• 1.2.2 觀察小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞激活及極化的時間變化25-29
• 1.3 討論29-31
• 1.4 小結(jié)31-32
• 二、VEGI對顱腦外傷小鼠小膠質(zhì)細胞激活及極化影響32-50
• 2.1 對象和方法32-36
• 2.1.1 實驗動物及分組32
• 2.1.2 實驗儀器32
• 2.1.3 實驗試劑32-33
• 2.1.4 小鼠液壓打擊模型的制備33
• 2.1.5 小鼠腦組織石蠟切片的制備33
• 2.1.6 腦組織石蠟切片免疫組織化學(xué)染色方法33
• 2.1.7 小鼠腦組織水含量的測定（干濕法）33-34
• 2.1.8 小鼠血腦屏障滲透率的測定34
• 2.1.9 mNSS評價小鼠顱腦外傷后神經(jīng)功能恢復(fù)情況34-35
• 2.1.10 統(tǒng)計學(xué)方法35-36
• 2.2 結(jié)果36-40
• 2.2.1 VEGI可以減少創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細胞的浸潤，減輕炎癥反應(yīng)36
• 2.2.2 VEGI可以影響小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞的極化36-38
• 2.2.3 VEGI降低血腦屏障滲透率，減輕腦水腫38-39
• 2.2.4 VEGI可以改善小鼠顱腦外傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)39-40
• 2.3 討論40-48
• 2.4 小結(jié)48-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述 小膠質(zhì)細胞在創(chuàng)傷性顱腦損傷中的進展性研究57-65
• 綜述參考文獻62-65
• 致謝65-66
• 個人簡歷66

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本文編號：870545