本文關(guān)鍵詞：重組腺病毒介導HLA-G基因轉(zhuǎn)染恒河猴樹突狀細胞對T細胞增殖的作用

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【摘要】：[目的]將介導HLA-G基因的重組腺病毒轉(zhuǎn)染恒河猴未成熟樹突狀細胞,鑒定基因進入細胞中并穩(wěn)定表達；探討恒河猴HLA-G重組腺病毒載體感染的恒河猴imDC對刺激T細胞增殖的作用。[方法]使用氯胺酮麻醉恒河猴,用穿刺針穿刺恒河猴髂后上嵴。待獲得新鮮的骨髓血后置入冰盒低溫保存。猴淋巴細胞分離液能夠有效分離單個核細胞與骨髓血中的其他細胞,免疫法獲得純度較高的CD34~+細胞。在體外成功獲取大量DC的關(guān)鍵則是添加兩種小劑量的細胞因子,即GM-CSF聯(lián)合IL-4。因此通過添加RPMI1640培養(yǎng)基給予細胞營養(yǎng)進行體外培養(yǎng)的同時添加兩類細胞因子,誘導CD34~+細胞分化。用細胞計數(shù)板計數(shù)生長良好的imDC,按細胞數(shù)量接種于細胞培養(yǎng)板的不同培養(yǎng)孔中,同時根據(jù)不同MOI值分別加入腺病毒病毒液,同時添加細胞因子和培養(yǎng)基,48小時后觀察細胞綠色熒光色素蛋白的表達情況。HLA-G重組腺病毒感染imDC,成功提取蛋白后,運用Western Blot檢測技術(shù)檢測目的蛋白表達的情況,對腺病毒感染imDC組和陰性對照組的灰度值比較分析。以刺激細胞和反應細胞來進行細胞混合淋巴細胞反應,根據(jù)不同的細胞組合和培養(yǎng)方式,將刺激細胞分為5組,各組分別進行誘導培養(yǎng)。各刺激細胞組分別依次刺激T細胞,按照不同的刺激細胞：反應細胞比例,獲取各組的刺激指數(shù)(stimulation index, SI)。運用統(tǒng)計學軟件分析各組刺激T細胞增殖的作用。[結(jié)果]免疫磁珠法獲得純度較高的CD34~+陽性細胞,進而運用細胞因子聯(lián)合誘導獲得imDC。當MOI不同的情況下,重組腺病毒介導HLA-G,成功轉(zhuǎn)染了生長良好的imDC,載體在imDC中的穩(wěn)定表達。Western blot檢測發(fā)現(xiàn),出現(xiàn)的特異性條帶與HLA-G表達的蛋白大小一致,在36kD見GADPH內(nèi)參蛋白表達,兩組重組腺病毒感染組較陰性對照組表達水平上升85.77%和86.57%,推斷表明HLA-G基因進入恒河猴imDC,在imDC中穩(wěn)定表達�；旌狭馨图毎囵B(yǎng),通過配對t檢驗分析得出結(jié)論：重組腺病毒感染imDC處理組對刺激T細胞增殖的能力顯著降低。[結(jié)論](一)重組腺病毒介導HLA-G基因轉(zhuǎn)染恒河猴imDC, HLA-G在imDC中穩(wěn)定表達；(二)LPS誘導的炎癥條件能夠促進imDC成熟,增強DC的抗原呈遞作用,促進T細胞增殖；(三) HLA-G能夠有效抑制恒河猴T細胞的增殖,同時也能在炎癥條件下抑制T細胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：HLA-G基因 肝移植 免疫耐受 恒河猴
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R657.3
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-20
• 實驗方法20-33
• 結(jié)果33-45
• 討論45-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-57
• 綜述57-66
• 參考文獻62-66
• 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果66-67
• 致謝67

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本文編號：729275